【摘 要】
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东北刺人参是长白山区一种珍稀药用植物,属于国家二级和吉林省一级保护植物。不定根(AR)培养是获取东北刺人参植物材料的重要途径,为了将培养的AR应用于实际生产中,对AR的提取方法及条件、生物活性等方面进行研究具有重要的意义。闪式提取技术是一种基于植物组织破碎原理的新型提取方法,具有提取速度快、提取率高等优点。因此,本研究对东北刺人参AR进行了闪式提取,利用响应面设计法对提取溶剂(乙醇)浓度、提取时间
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东北刺人参是长白山区一种珍稀药用植物,属于国家二级和吉林省一级保护植物。不定根(AR)培养是获取东北刺人参植物材料的重要途径,为了将培养的AR应用于实际生产中,对AR的提取方法及条件、生物活性等方面进行研究具有重要的意义。闪式提取技术是一种基于植物组织破碎原理的新型提取方法,具有提取速度快、提取率高等优点。因此,本研究对东北刺人参AR进行了闪式提取,利用响应面设计法对提取溶剂(乙醇)浓度、提取时间及液料比进行了条件优化,旨在提高东北刺人参AR闪式提取效率,为今后工业化提取提供理论依据。进一步,利用闪式提取的不定根提取物(ARE)和Ag NO3生物合成了银纳米颗粒(ARE-Ag NPs),通过调控ARE浓度、Ag NO3浓度、反应温度和反应时间,确定了适宜的ARE-Ag NPs合成条件。最后,对ARE-Ag NPs的抑菌活性及其机制、抗生物膜作用等进行了探究,为今后将ARE-Ag NPs应用于抑菌产品的开发和生产提供参考依据。闪式提取研究中,以不定根提取物中黄酮得率为响应值,根据响应面法对乙醇浓度、提取时间及液料比设计了17个组合,并进行提取,根据回归模型得到的优化组合是:提取时间为69 s,乙醇浓度为62.7%,料液比为57 m L·g-1,此条件下黄酮得率的预测值为7.12%,经验证黄酮得率为7.08%。对闪式提取方法与传统提取方法进行比较的结果为,闪式提取法得到的提取物的黄酮得率显著高于(p<0.05)热水浸提法和超声波热辅提取法得到的提取物。结果表明,闪式提取技术可用于今后东北刺人参不定根的工厂化提取中。利用ARE和Ag NO3生物合成Ag NPs时,ARE浓度、Ag NO3浓度、反应温度和反应时间对ARE-Ag NPs合成有很大影响,经筛选得到适宜的条件是:ARE浓度为1.5 mg·m L-1,Ag NO3浓度为1 mmol·m L-1,反应温度为95°C,反应时间为3 h。进一步,对ARE-Ag NPs进行了表征。紫外-可见光谱及X射线衍射分析结果证明了ARE-Ag NPs的成功合成;傅里叶红外光谱分析表明ARE中酚类、黄酮类、蛋白质等物质参与了ARE-Ag NPs的还原和封端;经扫描电子显微镜观察,ARE-Ag NPs大多呈球形,平均粒径为35.87 nm。ARE-Ag NPs的抑菌活性研究表明,ARE-Ag NPs具有强抑菌效果。在6种试验菌,即金黄色葡萄球菌(Sa)、猪霍乱沙门氏菌(Sc)、单核细胞增生李斯特菌、大肠杆菌(Ec)、蜡样芽孢杆菌、铜绿假单胞杆菌(Pa)中,ARE-Ag NPs对Ec和Pa的最低抑菌浓度(MIC)最低;2种菌混合的12组中,ARE-Ag NPs对Sa+Sc、Sa+Pa和Sc+Ec的MIC最低;3种菌混合的2组中,ARE-Ag NPs对Sa+Ec+Pa的MIC最低。进一步,利用Ec、Pa、Sa+Sc、Sa+Pa、Sc+Ec、Sa+Ec+Pa研究了ARE-Ag NPs的抑菌机制。经扫描电镜观察发现,ARE-Ag NPs处理后,细菌出现变形、皱缩等异常形态;ARE-Ag NPs处理后,菌胞外碱性磷酸酶活性、电导率、核酸和蛋白质浓度显著提高(p<0.05),表明胞内物质的泄露;对呼吸抑制率进行调查的结果,发现ARE-Ag NPs可明显抑制菌呼吸。这些研究结果表明,ARE-Ag NPs通过破坏菌细胞完整性、提高细胞膜渗透性及抑制菌呼吸起到了抑菌作用。利用Ec、Pa、Sa+Sc、Sa+Pa、Ec+Sc、Sa+Ec+Pa研究了ARE-Ag NPs抗生物膜的作用。经ARE-Ag NPs处理后,所用试验菌的生物膜形成量均显著减少(p<0.05),同时ARE-Ag NPs对形成的生物膜具有强清除能力。对生物膜菌胞外多糖含量进行测定的结果,发现经ARE-Ag NPs处理后菌胞外多糖含量显著降低(p<0.05)。综上所述,ARE-Ag NPs具有强抑菌及抗生物膜的作用,是一种可用于抑菌产品开发和生产的良好材料。
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