鸟苷产生菌的选育及其发酵条件研究

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本文以代谢控制发酵理论为指导,重点研究了鸟苷高产菌的选育及其发酵条件。主要研究内容和结果如下:(1)建立了发酵液中鸟苷定量测定的“纸层析-色斑洗脱比色法”,并对该方法的应用条件进行了研究。(2) 以枯草芽孢杆菌TA1001 为出发菌株,通过硫酸二乙酯(DES)及紫外诱变逐步诱变,定向选育出一株鸟苷产生菌TA208,其遗传标记为腺嘌呤缺陷、8-氮鸟嘌呤抗性和蛋氨酸亚砜抗性(Ade-+8-AGr+ MSOr)。在未经优化的摇瓶发酵条件下可产鸟苷15.82g/L。(3)研究了菌株TA208 的摇瓶分批发酵条件。应用偏最小二乘回归分析法和正交设计法,分别优化出种子培养基和发酵培养基的配比,并对种子培养条件和发酵条件进行了研究。在优化条件下,TA208 菌株摇瓶分批发酵48h,产鸟苷20.74g/L。(4)以菌株TA208 为供试菌株,在最佳发酵条件下进行5L 自控发酵罐分批发酵,鸟苷积累可达25.60g/L,比摇瓶分批发酵条件下产量提高了23.43%。利用5L 罐分批发酵数据,进行了发酵代谢过程分析及鸟苷分批发酵动力学研究,采用DPS 数据处理软件对模型参数求解并对菌体生长,葡萄糖消耗以及产物合成过程数据进行了拟合。本文选育获得的突变株TA208 遗传性状稳定,具备工业化生产潜力。通过鸟苷5L 罐分批发酵过程分析,建立鸟苷分批发酵动力学模型,有助于进一步研究该菌株的补料分批发酵动力学,对鸟苷工业化生产具有理论指导意义。
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