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目的:对蓝芪复方中板蓝根、黄芪、淫羊藿多糖进行分离纯化并测定其分子量,为后续蓝芪复方多糖注射剂的制备及免疫活性研究提供实验及物质基础。方法与结果:在单因素研究的基础上以多糖得率为指标采用正交设计试验,优化了板蓝根、黄芪、淫羊藿三味药材中多糖提取的最佳工艺。板蓝根:称取适量脱脂板蓝根药材,15倍量蒸馏水浸泡30min、90℃温浸提取2次,每次3 h,合并提取液,浓缩至1倍药材量,5000rpm离心10 min,上清液加入乙醇,使醇沉浓度75%,静置12h,滤过得到醇沉物,加入20倍量蒸馏水复溶醇沉物,得板蓝根多糖液,板蓝根多糖的提取率为2.34%。筛选最佳脱蛋白方法,采用Sevag法除去板蓝根多糖液中的蛋白;在单因素研究基础上以脱色率为指标采用正交设计试验筛选D152型大孔吸附树脂静态吸附最佳脱色工艺为:D152型大孔弱酸阳离子交换树脂,吸附时间180min、上样量为1倍柱体积,洗脱流速控制在2mL/min,过滤,收集滤液,测定多糖保留率、蛋白质脱除率和脱色率分别为93.91%、77.19%、61.51%;采用截留分子量为3000的透析袋,透析48h进一步除去板蓝根多糖液中的小分子色素及无机盐;脱色脱蛋白去离子处理的板蓝根多糖液上DEAE-Sephadex A-50凝胶层析柱,分别以不同浓度的盐进行洗脱后得到板蓝根多糖洗脱流份A、B、C、D、E五个组分,分别上凝胶柱Sephadex G100进一步分离纯化;通过紫外法测定各组分多糖液在260nm及280nm处无吸收峰,说明不含蛋白和核酸;采用高效液相色谱法测定五组分板蓝根多糖洗脱流份的分子量,色谱条件为Shodex OHpak SB-804 HQ 8.0mm×300mm凝胶色谱柱,以100%液相超纯水为流动相;380-ELSD型蒸发光散射检测器检测,测得标准葡聚糖分子量的线性关系为lgMr=-1.976RT+19.88,(R2=0.9941),Mr线性范围2.0E+04~5.0E+05,板蓝根多糖洗脱流份A含3种分子量分别为3.2E+05、1.9E+05、1.1E+05,洗脱流份B含2种分子量分别为2.8E+05、1.8E+05,洗脱流份C含3种分子量分别为3.1E+05、1.7E+05、3.9E+04,洗脱流份D含1种分子量为9.5E+03,洗脱流份E含1种分子量为1.3E+03。黄芪:称取脱脂黄芪适量,加入8倍量蒸馏水浸泡30 min,90℃温浸提取3次,每次1h,合并提取液,减压浓缩至5倍药材量,5000 rpm离心10 min,取上清,加入乙醇,使乙醇浓度为70%,静置12h,滤过得到醇沉物,加入20倍量蒸馏水复溶醇沉物,得黄芪多糖液,黄芪多糖的提取率为2.97%。采用sevag法除去黄芪多糖液中的蛋白;在单因素研究基础上以脱色率为指标采用正交设计试验筛选d152型大孔吸附树脂静态吸附最佳脱色工艺为:d152型大孔树脂进行动态吸附,吸附时间180min、黄芪多糖供试液上样浓度为0.08g/ml、上样量为1倍柱体积,流速控制在1ml/min,过滤,收集滤液,测定多糖保留率、蛋白质脱除率和脱色率分别为96.94%、62.67%、54.96%。采用截留分子量为7000的透析袋,透析24h进一步除去黄芪多糖液中的小分子色素及无机盐;脱色脱蛋白去离子处理的黄芪多糖液上deae-sephadexa-50凝胶层析柱,分别以不同浓度的盐进行洗脱后得到黄芪多糖洗脱流份a、b两个组分,分别上凝胶sephadexg100进一步分离纯化得三个洗脱流份a1、a2和b;通过紫外法测定各组分多糖液在260nm及280nm处无吸收峰,说明不含蛋白和核酸;黄芪多糖样品液的平均分子量测定条件同板蓝根多糖样品液,检测结果:黄芪多糖洗脱流份a1含1种分子量为1.2e+04,洗脱流份a2含2种分子量分别为1.6e+05、7.5e+04,洗脱流份b含1种分子量为3.4e+04。淫羊藿:称取脱脂淫羊藿适量,加入20倍量蒸馏水浸泡30min,90℃温浸提取2次,每次2h,合并提取液,减压浓缩至1倍药材量,5000rpm离心10min,取上清,加入乙醇,使乙醇浓度为70%,静置12h,滤过得到醇沉物,加入20倍量蒸馏水复溶醇沉物,得淫羊藿多糖液,淫羊藿多糖的提取率为2.04%。采用sevag法除去淫羊藿多糖液中的蛋白;在单因素研究基础上以脱色率为指标采用正交设计试验筛选ads-7大孔吸附树脂静态吸附最佳脱色工艺为:ads-7大孔树脂进行动态吸附,吸附时间180min、淫羊藿多糖供试液上样浓度为0.33g/ml、上样量为1.5倍柱体积,流速控制在1ml/min,过滤,收集滤液,测定多糖保留率、蛋白质脱除率和脱色率分别为88.42%、54.07%、63.59%。采用截留分子量为3000的透析袋,透析24h进一步除去淫羊藿多糖液中的小分子色素及无机盐;脱色脱蛋白去离子处理的淫羊藿多糖液上deae-sephadexa-50凝胶层析柱,分别以不同浓度的盐进行洗脱后得到淫羊藿多糖洗脱流份a、b、c三个组分,分别上凝胶sephadexg100进一步分离纯化得三个组分段多糖样品液;通过紫外法测定各组分多糖液在260nm及280nm处无吸收峰,说明不含蛋白和核酸;淫羊藿多糖样品液的平均分子量测定条件同板蓝根多糖样品液,检测结果:淫羊藿多糖洗脱流份A含1种分子量为1.3E+05,洗脱流份B含1种分子量为3.5E+05,洗脱流份C含1种分子量为6.2E+03。结论:蓝芪复方中各多糖的提取、纯化、分子量测定工艺合理、可行,可用于多糖的精制及分子量测定,为后续不同分子量的蓝芪复方多糖注射剂的制备及免疫活性筛选提供实验与物质基础。