东方田鼠抗日本血吸虫相关基因E77.43全长cDNA的克隆及生物信息学分析

来源 :中南大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xingfuli2009
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血吸虫病是一种人畜共患寄生虫病。流行病学调查和人工感染实验研究表明,东方田鼠对日本血吸虫感染具有天然抗性,而且这种性状能稳定遗传。 在前期研究中,课题组建立了东方田鼠骨髓细胞cDNA文库,并利用表达克隆法从东方田鼠骨髓细胞cDNA文库中分离获得了一个具有显著杀伤日本血吸虫童虫活性的基因E77.43的cDNA片段。为了得到E77.43全长cDNA序列,本研究通过分离东方田鼠骨髓细胞,提取东方田鼠骨髓细胞RNA并逆转录成cDNA,构建高全长比例cDNA文库,再利用RACE等技术扩增了E77.43的3和5末端,并将扩增的PCR产物克隆到载体,对重组体进行酶切与测序鉴定。 拼接后的E77.43 cDNA全长3274 bp,开放阅读框分析表明E77.43含有1179 bp的开放阅读框,编码392个氨基酸。预测其蛋白分子量为42.8 kD,理论等电点为6.07,是一个偏酸性、亲水性蛋白。对E77.43 ORF编码蛋白的序列相似性搜索和多序列比对结果表明,E77.43编码的产物为整合素连接激酶相关丝氨酸/苏氨酸磷酸酶(integrin-linked kinase-associated serine/threonine phosphatase,ILKAP),与之相互作用的蛋白为整合素连接蛋白激酶(integrin-linked protein kinase,ILK)。而现有研究表明,ILKAP在细胞生长与凋亡的调控过程中起重要作用。 E77.43全长cDNA的克隆,为进一步研究该基因编码产物的功能奠定了基础,为抗日本血吸虫病药物的开发提供了新思路。
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