Fibulin-2在胶质瘤细胞中的作用及机制研究

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目的:研究Fibulin-2在脑胶质瘤标本瘤体与瘤旁中的表达差异及其对胶质瘤细胞系生物学行为的影响方法:应用实时荧光定量PCR (Real-time PCR)技术检测3例胶质瘤病理组织及瘤周组织中Fibulin-2 mRNA的表达,研究Fibulin-2的表达差异,各组指标因素之间的差异性比较用t检验。利用基因干扰技术,构建特异性干扰FBLN2基因的shRNA病毒载体,包装病毒感染胶质瘤细胞系U-87mg细胞,通过Real-time PCR及蛋白免疫印迹技术(western-blot)检测Fibulin-2表达降低后,通过CCK-8实验检测分析U87mg细胞增殖情况、通过流式细胞术分析U87mg细胞的凋亡情况,通过transwell小室检测U87mg细胞的侵袭性及迁移性;利用基因过表达技术,构建FBLN2过表达病毒载体,包装病毒后感染U87细胞,通过WB及real-time PCR技术检测到FBLN2基因表达增加后再通过上述实验检测U87细胞的增殖、凋亡、侵袭性及迁移性等生物学行为,各组因素指标问差异性比较用t检验,通过对比FBLN2干扰、正常、过表达后细胞生物学行为的变化,来研究FBLN2及其蛋白产物在胶质瘤发生、发展中的作用。结果:1.FBLN2 mRNA水平在胶质瘤组织显著低于瘤旁组织(p<0.05,差异具有统计学意义);2.FBLN2基因沉默后U87mg细胞的增殖能力相对于对照组减弱而过表达后相对于对照组U87mg的增殖性增强(P<0.05,差异具有统计学意义);3. FBLN2基因沉默后对U87mg细胞系的凋亡增强,而过表达后U-87mg的凋亡无明显差异;4. FBLN2基因沉默后U87mg细胞系的侵袭性增强(p<0.05,差异具有统计学意义),而过表达后侵袭性减弱;5. FBLN2基因沉默U-87mg细胞系的迁移性增强(p<0.05,差异具有统计学意义)而过表达后迁移能力减弱。结论:fibulin-2在胶质瘤病理组织中瘤体与瘤旁组织具有显著差别,肿瘤组织中fibulin-2的mRNA水平显著低于瘤周组织,在细胞系实验中,FBLN2基因过表达组细胞的增殖性增强于干扰组,凋亡无明显变化,侵袭性、迁移性:FBLN过表达组<FBLN2正常组<FBLN2干扰组。这与既往的文献报道在非转移性实体肿瘤中FBLN2作为抑癌基因的报道相同,提示fibulin-2与胶质瘤的进展可能相关。
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