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背景：前列腺癌是全世界男性面临的重要的公共卫生问题。前列腺癌由激素依赖性进展为去势抵抗性,是导致肿瘤治疗失败、患者死亡的重要原因。小RNA诱导的基因激活是分子生物学领域新兴的话题,一系列研究显示特殊设计的小RNA能够在转录水平上调靶基因的表达。该方法为去势抵抗性前列腺癌(CRPC)的基因靶向治疗提供了全新的策略。目的：利用小激活RNA (saRNA)上调CRPC中缺陷基因INTS6的表达,在体内和体外两个水平研究INTS6对CRPC的生物学作用及机制。方法：1.利用免疫组化方法检测组织芯片中28对前列腺癌和瘤旁组织INTS6蛋白的表达情况。2.针对INTS6基因启动子区,按照一定的原则设计saRNA.利用定量PCR、蛋白印迹以及细胞活力测定等方法,在CRPC细胞和正常上皮来源的细胞中挑选既能够上调INTS6表达,又对肿瘤细胞的活力具有一定专一性抑制作用的小RNA,并对RNA激活的时间、剂量、表遗传学和双链选择等特征进行鉴定。3.利用流式细胞技术和Transewell实验,检测saRNA处理后CRPC细胞周期、凋亡、迁移和侵袭能力的变化。通过定量PCR、蛋白印迹和细胞免疫荧光等技术手段,评价saRNA诱导INTS6基因激活对Wnt信号通路的影响。4.构建裸鼠的皮下荷PC3肿瘤模型,瘤内注射saRNA,观察在体水平saRNA对CRPC的抑制作用。结果：1.与瘤旁组织相比,前列腺癌组织中INTS6蛋白表达水平下降。2.设计并筛选得到INTS6saRNA-915,该小RNA能够在转录水平上调CRPC细胞中INTS6基因的表达,并且表现出一定的肿瘤特异性抑制作用。saRNA对靶基因的激活作用出现于处理后第2天,在第4--5天达到高峰,20nM的处理浓度激活效果较强。saRNA作用后,靶基因启动子区出现相应的表遗传学修饰改变。saRNA任何一条单链结构或功能的丧失都会影响其对INTS6基因的激活作用。3. saRNA作用于CRPC细胞后,抑制细胞的增殖能力,诱导细胞发生G0/G1期周期阻滞,同时抑制细胞的迁移和侵袭能力。saRNA在发挥上述作用的同时,细胞中P-catenin、cyclin D1、Fra-1和MET等Wrnt关键信号蛋白受到抑制,这种抑制作用依赖INTS6的正常表达。4.成功构建裸鼠的皮下荷PC3肿瘤模型。瘤内给予脂质体包裹的INTS6saRNA,观察到移植瘤的生长受到明显抑制,同时检测到瘤组织中INTS6蛋白表达升高,增殖相关蛋白Ki67和PCNA表达下调。结论：针对前列腺癌中缺陷的抑癌基因基INTS6设计并导入激活RNA能够有效上调基因的表达,同时抑制肿瘤的增殖和运动能力。该方法为去势抵抗性前列腺癌的基因靶向治疗提供了新的实验依据。