论文部分内容阅读
目的：本研究旨在通过定量检测骨髓增殖性肿瘤(myeloproliferative neoplasm, MPN)患者中JAK2V617F突变比例和其信号通路下游蛋白P-STAT5的表达情况,以探索JAK2V617F突变负荷与P-STAT5表达量的相关性及两者与临床特征之间的关系,进一步证实JAK2V617F突变及其下游JAK/STAT通路在MPN发病中的分子生物学意义,为其在临床诊断及靶向治疗研究中的应用提供理论依据。方法：按照WHO最新修订的诊断标准,选择山东大学附属省立医院血液科首次确诊的45名BCR-ABL阴性的MPN患者及15例健康成年人为研究对象,抽取外周血5m1并分离单个核细胞,提取细胞中基因组DNA,采用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time fluorescent quantitative PCR)定量检测实验对象的JAK2V617F突变比例；同时提取单个核细胞中总蛋白质,通过测定蛋白浓度,确定等量上样体积,采用免疫蛋白印记法(western blot)分离显示目的蛋白磷酸化STAT5(p-STAT5),并结合美国UVP灰度值分析仪定量测定P-STAT5蛋白的表达灰度水平；将二者定量检测结果进行logistic回归性分析,进一步结合研究对象临床确诊时的病例资料,包括性别、年龄、白细胞及血小板计数、血红蛋白、红细胞压积、骨髓细胞学分析结果、病理结果、染色体核型、B超下肝脾检查、出血及血栓栓塞事件等进行统计分析。统计软件采用SPSS15.0, P<0.05有统计学意义。结果：研究结果表明,BCR-ABL (-)的MPN患者总体JAK2V617F突变阳性率为73.3%(33/45)：这其中,真性红细胞增多症(PV)突变阳性率为83.3%(20/24),原发性血小板增多症(ET)突变阳性率为68.8%(11/16),特发性骨髓纤维化(IMF)阳性率只有40.0%(2/5)；定量检测出的JAK2V617F突变负荷在PV、ET、IMF中分别为0.472±0.245,0.216±0.162及0.435±0.239；对应的P-STAT5蛋白表达灰度值分别为1.396±0.758,0.760±0.623和0.792±0.612, JAK2V617F突变负荷越高,对应的P-STAT5蛋白灰度值也高。将MPN患者的突变比例及P-STAT5蛋白灰度值进行logistic线性回归分析,可见二者呈显著线性相关(P<0.05)。定义JAK2V617F基因突变负荷为y,P-STAT5蛋白灰度值为x,所得回归直线方程为y=-34.13x+5.88,相关系数R=0.976。与临床特征的相关性分析结果：PV患者中,JAK2V617F突变负荷越高者,白细胞计数、血红蛋白及红细胞压积越高,血小板越低；ET患者JAK2V617F突变负荷越高者,年龄越大,白细胞计数、血红蛋白及红细胞压积越高,血小板无明显相关性；而在IMF患者中,JAK2V617F突变负荷越高,白细胞和血小板计数、血红蛋白及红细胞压积均较低。JAK2V617突变与性别及染色体核型异常无明显相关性(P>0.05),三类主要并发症(脾大、出血、血栓)在突变阳性MPN患者中的发生率均高于阴性者,差异具有统计学意义(P<0.05),即突变阳性者更易发生脾肿大,出血及血栓事件等并发症。结论：1. JAK2V617F在BCR-ABL阴性的MPN中阳性率较高,是疾病诊断的重要指标；2. JAK2V617F突变与下游P-STAT5蛋白的表达呈显著线性相关性,进一步证实JAK2V617F突变导致下游信号通路异常是MPN的重要发病机制,为MPN靶向治疗提供新的思路；3. JAK2V617F基因突变比例与MPN患者临床特征存在明显关联,且突变负荷高的MPN患者发生脾大、血栓事件等并发症的几率亦高,这些都为JAK2V617F定量监测在疾病诊断、治疗效果评估及预后判断中的应用提供了理论基础。