【摘 要】
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目的:生长因子受体结合蛋白2结合蛋白1(Gab1)是一种接头蛋白,在多种酪氨酸激酶受体介导的细胞生长和迁移中起关键调控作用。本研究旨在探讨在肝细胞生长因子(HGF)刺激下,过表达Gab1蛋白对内皮祖细胞增殖与迁移的影响及其分子机制,为组织工程瓣膜快速再内皮化提供新的思路和理论支持。方法:用密度梯度离心和诱导分化分离培养方法从人脐血中提取内皮祖细胞,经过鉴定后,将其分为四组:正常对照组、HGF刺激组
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目的:生长因子受体结合蛋白2结合蛋白1(Gab1)是一种接头蛋白,在多种酪氨酸激酶受体介导的细胞生长和迁移中起关键调控作用。本研究旨在探讨在肝细胞生长因子(HGF)刺激下,过表达Gab1蛋白对内皮祖细胞增殖与迁移的影响及其分子机制,为组织工程瓣膜快速再内皮化提供新的思路和理论支持。方法:用密度梯度离心和诱导分化分离培养方法从人脐血中提取内皮祖细胞,经过鉴定后,将其分为四组:正常对照组、HGF刺激组、过表达Gab1组、过表达Gab1+HGF刺激组。正常对照组中内皮祖细胞正常培养;HGF刺激组中内皮祖细胞正常培养后给予HGF刺激处理;过表达Gab1组中内皮祖细胞用包含Gab1基因的腺病毒进行转染处理,增加细胞内Gab1蛋白的表达,余处理同正常对照组;过表达Gab1+HGF刺激组中内皮祖细胞经腺病毒处理后给予HGF刺激。采用胸腺嘧啶类似物Edu法、细胞计数试剂盒-8(CCK-8)、细胞划痕实验等多种方法比较不同组内Gab1表达情况及内皮祖细胞增殖和迁移能力。此外,采用Western blot法和PCR技术检测Gab1、SHP2及ERK1/2的磷酸化水平。结果:与正常对照组相比,过表达Gab1组中内皮祖细胞的增殖和迁移能力增强;HGF刺激组的内皮祖细胞中Gab1、SHP2及ERK1/2的磷酸化水平及细胞的增殖和迁移能力均高于其对照组和过表达Gab1组;过表达Gab1+HGF刺激组的内皮祖细胞较其他组相比,Gab1蛋白表达量最高,Gab1、SHP2及ERK1/2的磷酸化水平最高,增殖和迁移能力最强。结论:过表达Gab1可以促进内皮祖细胞增殖和迁移,这一效应在HGF的刺激下被放大,过表达Gab1可以促进HGF介导的内皮祖细胞增殖与迁移。HGF刺激可以促进内皮祖细胞中Gab1、SHP2及ERK1/2的磷酸化水平。过表达Gab1可以提高HGF介导的内皮祖细胞内Gab1蛋白磷酸化水平,从而增加细胞外磷酸化ERK 1/2的表达,Gab1通过ERK1/2通路发挥促进内皮祖细胞增殖与迁移的作用。
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