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疼痛是伤害性或潜在组织损伤引起的不愉快感觉,常伴有内分泌、代谢、免疫和精神心理改变。课题组采用有机溶剂萃取、大孔树脂层析等方法从野生鸡矢藤中分离提取到其活性成份鸡矢藤环烯醚萜总苷（Iridoid glycosides of paederia scandens ,IGPS）,主要包括车叶草苷（asperuloside）、鸡矢藤苷（paederoside）及鸡矢藤次苷（scandoside）等。中医理论认为鸡矢藤味酸、苦入肝胃而有渗利水湿、祛风活血、舒筋活络、止痛解毒等功效。前期研究结果显示,IGPS对多种疼痛模型均具有良好的镇痛作用,本实验旨在研究IGPS含药血清对体外培养新生大鼠脊髓背根神经节（dorsal root ganglia,DRG）神经元的影响,寻求IGPS含药血清镇痛作用的有效靶点,为其临床提供充足的理论和实验依据。1.新生大鼠背根神经节神经元细胞的培养无菌条件下,取新生大鼠背根神经节,加入胶原酶-中性蛋白酶消化液,37℃CO2培养箱消化,加入5-氟-2’脱氧尿苷（5-FUDR）以纯化神经元,MEM-F12培养基培养,用神经元特异性烯醇化酶（ neuron- specific enolase, NSE）免疫组织化学染色鉴定DRG神经元的纯度。细胞生存状态良好,可以纯活两周以上。低浓度的5-FUDR（10mmol/L）可以很好的纯化DRG神经元,细胞纯度高于90%以上。2.新生大鼠背根神经节神经元损伤模型的制备DRG神经元培养至第五天,状态完全稳定后加入不同浓度（20、200、2000μmol/L）的NO供体硝普钠（sodium nitroprusside, SNP）作用于DRG神经元15min,制备DRG神经元损伤模型。经台盼蓝染色显示,在200μmol/L浓度SNP作用下,DRG神经元的存活率为50%,DRG损伤程度最为适宜。3. IGPS含药血清的制备SD大鼠随机分组, IGPS（70、140、280mg/kg）灌胃（ig）给药,每日2次,连续3d。末次灌胃1 h后固定大鼠,腹主动脉采血,4℃下静置过夜,微孔滤膜滤过除菌分离血清,-2 0℃条件下保存备用。各组含药血清用细胞培养基按1:8的比例稀释。4. IGPS含药血清对新生大鼠背根神经节神经元SNP损伤模型的影响研究IGPS含药血清对新生大鼠DRG神经元影响及其可能机制。台盼蓝染色法及MTT法测定IGPS含药血清对SNP损伤后DRG神经元的存活率的影响;激光共聚焦显微镜检测新生大鼠DRG神经元胞内钙离子浓度的变化;紫外分光光度法测定新生大鼠DRG神经元NO含量和iNOS活性;放射免疫分析法测定新生大鼠DRG神经元cGMP的含量; RT-PCR法检测新生大鼠DRG神经元iNOSmRNA、PKGΙαmRNA和PKGIβmRNA的表达。结果显示,IGPS含药血清（140、280mg/kg,ig）可以明显抑制SNP损伤后DRG神经元的死亡;IGPS含药血清（280mg/kg,ig）组可有效抑制损伤DRG胞内钙离子浓度的升高;IGPS含药血清（140、280mg/kg,ig）能显著降低SNP损伤DRG神经元的NO含量、iNOS活性及cGMP含量,抑制iNOSmRNA、PKGΙαmRNA和PKGIβmRNA的表达。提示IGPS含药血清对SNP所致损伤DRG神经元有显著的保护作用,其机制可能与抑制Ca2+-NO/cGMP/PKG信号转导通路有关。结论:IGPS含药血清对SNP损伤背根神经节神经元有较好的保护作用,其机制可能与抑制Ca2+-NO/cGMP/PKG信号通路有关。