用PCR方法从含人肿瘤坏死因子α（hTNF-α）基因的pM3-neo质粒中扩增出hTNF-α的cDNA序列，用限制性内切酶BamHⅠ、HindⅢ酶切消化PCR产物后插入到经过相同内切酶酶切的大肠杆菌表达载体pTrcHis2A质粒，构建成pTrcHis2A-hTNF-α重组表达质粒。经过鉴定后，将重组质粒命名为PTH。 将PTH质粒转化宿主大肠杆菌，构建基因工程菌hTNF-α-pTrcHis2A-JM109，加入IPTG作为诱导物，诱导hTNF-α基因表达。SDS-PAGE检测表达产物的分子量，得到一条分子量约为20kd的区带，与融合蛋白的分子量相符；以融合蛋白α-末端的6个串联组氨酸作为检测标记，用辣根过氧化物酶标记的抗C-末端组氨酸抗体进行western-blotting实验，结果为阳性，进一步说明外源基因hTNF-α在大肠杆菌中得到表达；用表达的hTNF-α进行体外细胞毒实验，比活性为1.47×10₃U/mg，证实表达的hTNF-α具有生物学活性。 采用不同浓度的IPTG和诱导时间，诱导基因工程菌hTNF-α-pTrcHis2A-JM109表达hTNF-α，确定IPTG最佳诱导浓度为1mmol；最佳诱导时间为4小时。 将PTH质粒转化到不同的宿主大肠杆菌DH-5α、TG1和BL-21中，比较hTNF-α在其中的表达情况，发现hTNF-α这些宿主中均可以得到表达，表达量没有明显差别。 用离子交换层析和亲和层析对表达的hTNF-α进行纯化，分别得到占蛋白总含量48.9％和50.2％的hTNF-α，回收率分别为46.2％和50％。