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研究背景:癌症是严重危害人类健康的恶性疾病。一系列癌基因和抑癌基因的发现,似乎表明,癌症是一种基因疾病。但是,对于癌症的细胞起源还没有定论。早期的观点认为,癌症起源于正常细胞的随机突变,癌症组织中的癌细胞是均质的。肿瘤干细胞理论的提出,对过去的理论提出了挑战。肿瘤干细胞理论认为,肿瘤组织象人类社会一样是有阶层的,肿瘤组织是由肿瘤干细胞、前体细胞和终末分化细胞组成。肿瘤起源于正常干细胞的突变,肿瘤干细胞只占肿瘤的极少一部分。研究人员已经在白血病和几种实体肿瘤,例如乳腺癌、脑肿瘤、前列腺癌、卵巢癌、结肠癌、胰腺癌、肝癌、肺癌中找到了肿瘤干细胞。目前还没有明确找到膀胱癌肿瘤干细胞的报道。
研究目的:
利用双色激发FACS寻找和分离膀胱移行细胞癌细胞系T24、EJ、UM-UC-3和新鲜膀胱移行细胞癌组织中的侧群细胞,并利用干细胞细胞生物学和分子生物学的方法鉴定膀胱移行细胞癌细胞系T24中的侧群细胞是否具有肿瘤干细胞的特点。
材料与方法:
本研究利用侧群(SP)细胞这种新的寻找干细胞的方法分析了膀胱移行细胞癌细胞系T24、EJ、UM—UC—3和4例新鲜的膀胱癌组织中是否存在侧群细胞及其比例,并且从增殖能力、克隆形成能力、长期分化能力、细胞周期的分布、干性基因的表达、对放化疗的抵抗等方面证实T24中SP细胞是否有肿瘤干细胞的特点。
结果:
我们的研究结果表明,T24、UM—UC—3和4例新鲜的膀胱癌组织中存在不同比例的侧群细胞,EJ、UM—UC—3中没有侧群细胞。而且,我们发现T24中SP细胞比NSP细胞有更强的生长增殖能力(P<0.01)和克隆形成能力(48.7±2.3%vs7.8±1.9%,P<0.01);SP细胞中有更多的细胞处于G0/G1期(87.4%vs63.3%,P<0.05),更少的细胞处于S期(31.1%vs9.1%,P<0.05);分选后的SP和NSP细胞经过约10天的常规培养,SP细胞中NSP的比例占76.2%,而NSP细胞中SP的比例只占2.6%;RT—PCR的结果表明SP细胞中ABCG2和干性基因Notch-1、β—catenin、SMO的表达更高;SP细胞对放化疗有更强的抵抗能力,而且这种抵抗能力与ABCG2的高表达有关。
结论:
1.膀胱移行细胞癌细胞系T24,甚至新鲜的膀胱癌组织中存在不同比例的侧群细胞。
2.有些膀胱移行细胞癌细胞系不含侧群细胞,比如EJ、UM—UC—3。
3.T24中的侧群细胞有肿瘤干细胞的特点。