【摘 要】
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第一部分 反义c-myc重组腺病毒的构建及其抗骨肉瘤细胞作用的实验研究 目的:C-myc原癌基因在细胞的增殖调节中发挥重要作用,研究表明C-myc在骨肉瘤中常常扩增和过表达,而且具
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第一部分 反义c-myc重组腺病毒的构建及其抗骨肉瘤细胞作用的实验研究 目的:C-myc原癌基因在细胞的增殖调节中发挥重要作用,研究表明C-myc在骨肉瘤中常常扩增和过表达,而且具有促进细胞转化和诱导转移的特性。本文构建表达反义c-myc的重组腺病毒,并探讨其对P53基因型不同的骨肉瘤细胞系MG-63(P53缺失型)、U2OS(P53野生型)的作用影响。方法:应用基因重组技术,将约750bp的人c-myc基因第二外显子cDNA反向克隆到腺病毒p-shutter-CMV载体,并与pAdEasy-1共转染BJ5183细菌,产生重组腺病毒质粒,然后经XL10-Gold扩增、在AD-293细胞中包装鉴定后,构建表达反义c-myc的重组腺病毒(Ad-Asc-myc),并在体外感染骨肉瘤MG-63、U2OS细胞,采用蛋白免疫印迹(Western blot)、吖啶橙染色、RT-PCR、流式细胞仪
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