论文部分内容阅读
[目的]本实验通过建立哺乳期使用氟西汀大鼠动物模型,模拟发育期高血5-羟色胺自闭症动物模型,观察哺乳期使用氟西汀对子代大鼠行为学、5-羟色胺能神经元环路功能的影响,从而探讨哺乳期使用SSRI类抗抑郁药对子代行为学影响及其可能的病理生理机制,以期为自闭症发病机制的研究提供理论依据。[方法]将SD妊娠大鼠随机分成2组,每组各3只。待分娩后第5-21d予以实验组大鼠氟西汀(12mg/kg),对照组大鼠予以等量的生理盐水,期间正常哺乳。婴儿期分别测量子代大鼠体重、毛发、睁眼、听觉和自由悬挂实验情况。待子代出生后第21天断奶并将雌雄大鼠分笼饲养。儿童期子代大鼠行埋藏食物小球实验和旷场试验。儿童期(P35d)和青年期(P75d)分别取材行Western-Blot、IHC、IF检测子代大鼠前额皮质和中缝核SERT及TPH的含量。同时,应用ELISA技术检测儿童期和青年期前额皮质和中缝核5-HT含量。[结果]一、行为学实验结果：1.体重：与对照组相比,氟西汀组体重9d,11d,13d均较对照组明显降低,有显著性差异(P<0.05)；2.毛发：与对照组相比,氟西汀组毛发长度9d,11d无明显降低,没有显著性差异(P>0.05)。在13d实验组与对照组相比明显降低,有显著性差异(P<0.05)：3.睁眼：13d氟西汀组与对照组相比睁眼程度无明显改变(P>0.05)；4.听觉：与对照组相比,氟西汀组听觉敏感性9d,11d明显增加,有显著性差异(P<0.01)。13d实验组与对照组相比听觉敏感性无明显增加,无显著性差异(P>0.05)；5.埋藏食物小球实验：与对照组相比,氟西汀组仔鼠埋藏食物小球实验时间26d无明显改变,无显著性差异(P>0.05)；6.自由悬挂实验：与对照组相比,氟西汀组自由悬挂实验时间在1ld,13d均明显减少,有显著性差异(P<0.01)；7.旷场实验：与对照组相比,氟西汀组大便粒数在28d,29d,30d,31d均明显增加,有显著性差异(P<0.01)；氟西汀组大便粒数平均值也有显著性差异(P<0.01)。二、免疫印迹、免疫组化、免疫荧光法检测前额皮质和中缝核SERT和TPH蛋白；酶联免疫吸附法检测前额叶皮质和中缝核5-HT的含量：1.应用Western-blot、IHC、IF技术检测儿童期(35d)和青年期(75d) SERT蛋白在前额皮质和中缝核表达,结果发现：与哺乳期盐水暴露组相比,FLX暴露组儿童期和青年期SERT蛋白表达明显下调,有显著性差异(P<0.05)。2.应用Western-blot、IHC、IF技术检测儿童期(35d)和青年期(75d)TPH蛋白在前额皮质和中缝核表达,结果发现：与哺乳期盐水暴露组子代相比,FLX暴露组儿童TPH蛋白表达明显下调,有显著性差异(P<0.05)。3.应用IF技术检测仔鼠前额皮质神经元轴突及数目,结果发现：氟西汀暴露组仔鼠儿童期(35d)和青年期(75d)前额叶皮质神经元数量和轴突明显减少。4.酶联免疫吸附法检测5-HT在前额叶皮质和中缝核含量,结果发现：与对照组相比,儿童期(35d)氟西汀组5-HT在大脑总含量明显增高,有显著性差异(P<0.01)；婴儿期(75d)氟西汀组5-HT在前额皮质和中缝核含量均明显增高,有显著性差异(P<0.05)。[结论]1.哺乳期暴露于氟西汀导致子代的发育和行为异常。2.哺乳期暴露于氟西汀可通过下调子代大鼠前额皮质和中缝核中TPH、SERT蛋白表达提高5-HT含量。3.暴露于氟西汀子代脑组织5-HT含量升高,可能导致类自闭行为。4.哺乳期暴露于SSRIs类抗抑郁药对子代大鼠行为学有显著影响,这种影响可能是由5-羟色胺能神经元系统紊乱所致。