论文部分内容阅读
目的：本研究旨在通过建立不同细胞间非接触共培养模型，来观察骨髓间充质干细胞（Bone Marrow-derived Mesenchymal Stem Cells，BMSCs）对大鼠皮层神经元缺氧缺糖（Oxygen-glucose deprivation，OGD）损伤后轴突的生长及信号通道蛋白AKT/GSK-3β/CRMP-2表达的影响，以探讨BMSCs对神经元损伤后轴突生长的影响及机制，为干细胞移植治疗缺血性脑血管病提供理论依据。方法：1、BMSCs和大鼠皮层神经元的体外分离培养及鉴定。2、取培养第5d的神经元进行氧糖剥夺培养90min，建立OGD损伤模型；12小时后分别通过光镜和电子显微镜观察神经元OGD损伤情况。3、通过transwell载体建立OGD损伤后的神经元与第3代BMSCs的非接触共培养模型，实验随机分为四组：正常对照组（Control组）、OGD模型组（OGD组）、共培养组（OGD+BMSCs组）、药物干预组（OGD+BMSCs+LY294002组）。4、各组培养48小时后进行免疫荧光染色后，ZEISS LSM710激光共聚焦显微镜拍照， ZEN2009软件分析测量各组轴突的长度。5、各组培养24小时后通过western blot检测AKT、pAKT、GSK-3β、pGSK-3β、CRMP-2、pCRMP-2、GAP-43蛋白的表达量。6、统计学处理。结果：1、OGD培养后的神经元轴突受损缩短、部分缺失,线粒体、内质网等亚细胞器肿胀、部分溶解。2、轴突平均长度测量结果显示：OGD组轴突平均长度较正常组明显缩短（P<0.01）；OGD+BMSCs组的平均轴突长度较OGD组及OGD+BMSCs+LY294002组延长（P<0.05）。3、western blot结果显示：OGD+BMSCs组的pAKT、pGSK-3β、GAP-43表达水平较OGD组及OGD+BMSCs+LY294002组增高（P<0.05），而pCRMP-2表达水平降低（P<0.05），差异有统计学意义。结论：BMSCs可促进缺氧缺糖损伤后的神经元轴突的修复、生长，其机制可能通过自身分泌功能来激活AKT/GSK-3β/CRMP-2信号通道起作用。