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本研究采用核酸疫苗免疫的方法,探讨人巨细胞病毒(human cytomegalovirus, HCMV)对系统红斑狼疮(Systemic lupus erythematosus, SLE)的发病、疾病进程的影响。首先,本研究采用原核表达质粒pET-28b-pp65转化大肠杆菌原核表达系统,诱导pp65蛋白的原核表达,采用Ni2+亲和层析柱纯化目的蛋白。通过上述原核表达和纯化获得了高纯度抗原性良好的的重组人巨细胞病毒pp65蛋白,用其作为检测的抗原包被ELISA酶标板,对小鼠血清中anti-pp65抗体进行检测。之后,本研究采用酶切连接构建真核表达质粒pcDNA3.0-pp65作为免疫原,对小鼠进行免疫。以BXSB小鼠作为SLE动物模型,以C57BL/6小鼠作为健康对照模型,各模型设实验组(免疫pcDNA3.0-pp65核酸疫苗)和对照组(免疫pcDNA3.0空载体)。继而,本研究利用间接ELISA方法检测核酸疫苗的免疫效果(即anti-pp65IgG抗体)和SLE主要自身抗体(ANA和anti-dsDNA抗体)的滴度。并分析pp65对这些SLE指标的影响。同时利用间接免疫荧光(ⅡF)法检测各组小鼠血清中的ANA滴度和核型,并与间接ELISA的检测ANA的结果相互印证。采用竞争法ELISA(?)试剂盒检测各组小鼠血清中细胞因子(IL-1β和TNF-α)的浓度;采用反转录PCR和实时定量PCR方法(qRT-PCR)检测各组小鼠PBMCs中miR-125a, miR-146a, miR-126,分析这三种miRNAs与SLE进程及pp65免疫的联系。所有实验数据均通过Graphpad4.0软件进行统计分析(采用Mann-Whitney U检验分析组间差异)和统计图表的绘制,以分析pp65重组真核质粒免疫对小鼠血清中体液免疫反应和细胞因子的影响和PBMCs中SLE关键microRNA的水平影响,并综合探讨pp65免疫对正常小鼠和SLE小鼠在SLE疾病进程的影响。空质粒免疫后的研究结果表明,对照组BXSB小鼠和对照组C57BL/6小鼠血清中均未检测到IgG抗pp65抗体,对照组BXSB小鼠的ANA和抗dsDNA抗体水平随着小鼠周龄的增加自然上升,而对照组C57BL/6小鼠的ANA和抗dsDNA亢体一直为阴性。对照组BXSB小鼠血清中的IL-1β和TNF-α水平显著高于对照组C57BL/6小鼠。而对照组BXSB小鼠PBMCs中miR-125a, miR-146a, miR-126水平显著低于对照组C57BL/6小鼠(分别为对照组的0.50倍,p<0.01;0.47倍,p<0.01;0.18倍p<0.01)。pp65免疫后的研究结果表明,实验组BXSB小鼠与实验组C57BL/6小鼠血清中均检测到显著上升的抗pp65抗体,并且实验组两种小鼠血清中的ANA和抗dsDNA抗体显著高于注射空质粒的对照组。另外,在pp65免疫的实验组BXSB小鼠血清中检测到了显著上上调的IL-1β和TNF-α,而在C57BL/6小鼠血清中,pp65免疫组和对照组的IL-1β和TNF-α水平一直为阴性。另外,pp65核酸免疫导致BXSB小鼠(分别为对照组的0.46倍,p<0.01;0.52倍,p<0.01;0.17倍p<0.01)与C57BL/6小鼠(分别为对照组的0.48倍,p<0.01；0.53倍,p<0.01；0.38倍p<0.01) PBMCs中miR-125a,miR-146a, miR-126水平相比对照组均显著下降。以上研究结果提示,pp65作为HCMV的主要表位,能够诱导BXSB小鼠和C57BL/6小鼠产生SLE样自身体液免疫。在SLE敏感的BXSB小鼠中,pp65能够显著上调血清ANA和抗dsDNA抗体的水平,还能显著上调血清IL-1β和TNF-α的水平,显著下调PBMCs中miR-125a, miR-146a和miR-126的水平。在正常的C57BL/6小鼠中,pp65能够显著上调血清ANA和抗dsDNA抗体的水平,显著下调PBMCs中miR-125a, miR-146a.和miR-126的水平,却不能影响血清IL-1β和TNF-α的水平。由此可推断,pp65能够在一定程度上诱发正常个体的SLE样症状,然而这种诱发能力是有限的,不及对SLE敏感个体的影响幅度,这种影响可能是在早期体现在microRNA水平的变化。综上所述,该研究首次通过动物实验证实,pp65能够在C57BL/6小鼠中诱发SLE样自身免疫反应,在SLE易感的BXSB小鼠中可加重SLE的进展。在本项研究结果基础上进一步探讨HCMV作为SLE的诱导因子在细胞学、组织学上的改变,将对SLE的病因学和发病机制的研究提供一个新思路,从而更有效地指导临床治疗策略。