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目的：本研究以MSCs为种子细胞，以Bio-Oss小牛无机骨颗粒为生物支架材料，构建MSCs-Bio-Oss组织工程化骨。从形态学、分子免疫学等多方面进行观察和检测。从而探讨狗MSCs成骨活性及与生物支架材料Bio-Oss复合构建组织工程化骨的可行性。为牙周骨组织缺损的组织工程重建奠定理论基础，为临床牙周病的治疗提供新的思路和方法。
方法：1.杂种狗MSCs的体外分离和培养：取健康杂种狗骨髓5ml，采用密度梯度离心法分离出MSCs，用含有10％FBS的DMEM培养液(低糖)，置于37℃、5％CO2培养箱内孵育，并进行消化传代(1∶3)。整个培养过程用倒置相差显微镜观察，并进行细胞表面因子CD44的标记检测。
2.杂种狗MSCs的体外成骨诱导分化：取第3代培养细胞接种于24孔板中，加入含有成骨诱导剂(10-8mol/l地赛米松，10mmol/1β-甘油磷酸脂,50mg/l抗坏死血酸)、10％FBS的DMEM培养液(高糖)培养。整个培养过程用倒置相差显微镜观察，并进行钙结节染色、ALP的定性和定量检测。
3.构建MSCs-Bio-Oss组织工程化骨：取成骨诱导后的MSCs，以较高密度种植于Bio-Oss骨颗粒表面，静置孵育培养。培养过程中进行倒置相差显微镜、电子扫描显微镜观察。
结果：1.原代MSCs呈圆形、椭圆形、梭形等不均一形态，传代后呈现较为均一的纺锤形，排列紧密呈旋涡状生长，即成纤维细胞群状。免疫荧光法标记CD44表面抗原可见胞浆表达呈阳性。成骨诱导分化后，钙结节的茜素红S染色呈阳性，ALP的Gomori法染色呈阳性，ALP活性测定：实验组ALP含量明显高于对照组，有统计学意义。
2.观察构建MSCs-Bio-Oss组织工程化骨过程：可见MSCs向骨粉颗粒表面爬行附着，骨粉颗粒表面的MSCs与骨粉颗粒之间MSCs联结形成单层结构。电子扫描显微镜观察：在骨粉颗粒表面有较多的细胞贴壁附着生长，细胞状态良好。
结论：杂种狗MSCs易于在体外分离、培养，有较好的成骨活性，作为种子细胞与生物支架材料Bio-Oss复合构建组织工程化骨是可行的。