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本研究以真菌毒素玉米赤霉烯酮(ZEN)、T-2毒素为研究对象,研制出检测玉米赤霉烯酮(ZEN)、T-2毒素的单残留免疫层析检测试纸条以及同时检测两种真菌毒素的多残留免疫层析检测试纸条。本研究通过优化,建立T-2毒素免疫层析检测试纸条方法最佳工作条件:选取18nm粒径的胶体金;硝酸纤维素膜(NC膜)选择Millipore HF 135s;包被原T-2-BSA包被量为0.37 μg/条,稀释液为PBS缓冲液;羊抗鼠二抗稀释倍数为40倍,稀释液为PB缓冲液;每1mL胶体金标记抗体量为12 μg, pH为8.0 ;金标抗体稀释倍数为6倍;金标垫处理液选择PBST;标准品稀释液为PBST;检测时间为10 min,标准品检测限为5 μg/L,实际样品检测限为30 μg/kg;检测结果特异性良好,与其他真菌毒素无交叉反应。本研究通过优化,建立ZEN毒素免疫层析检测试纸条方法最佳工作条件:选取18nm粒径的胶体金;硝酸纤维素膜(NC膜)选择Millipore HF 135s;包被原ZEN-OVA包被量为0.3 μg/条,稀释液为PBS缓冲液;羊抗鼠二抗稀释倍数为20倍,稀释液为PB缓冲液;每1mL胶体金标记抗体量为24 μg,pH为8.0 ;金标抗体稀释倍数为6倍;金标垫处理液选择PBST;标准品稀释液为PBST;检测时间为10min,标准品检测限为10 μg/L,实际样品检测限为60μg/kg,检测结果与其他真菌毒素无交叉,特异性好。本研究通过对T-2/ZEN多残留免疫层析检测试纸条方法各工作条件优化,得到最适条件:选取18 nm粒径的胶体金;硝酸纤维素膜(NC膜)选择Millipore HF 135s;将两种抗体分别与1 mL胶体金标记,重悬复溶后混合铺金,标记量及pH条件与单残留试纸条相同;胶体金标记ZEN抗体过程中添加BSA 40 μL,胶体金标记T-2抗体过程中添加BSA为常规量20 μL;金标抗体稀释倍数为6倍;NC膜上包被顺序从上至下分别为C线(羊抗鼠二抗),T线(T-2-BSA),T线(ZEN-OVA),其中羊抗鼠二抗用PB缓冲液30倍稀释,T-2-BSA、ZEN-OVA包被量及稀释液均和单残留免疫层析检测试纸条相同。金标垫处理液为PBST,标准品稀释液为PBST,检测时间为10 min;两种毒素检测之间无交叉干扰;标准品检测限分别为T-2毒素5μg/L,ZEN10μg/L,实际样品检测限分别为 T-2 毒素 30μg/kg,ZEN60μg/kg。