大鼠成骨细胞与壳聚糖/羟基磷灰石复合支架降解产物的生物相容性

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背景:伴随着现代医学科学的飞速发展,在医学各个领域中都获得了令人振奋的成果。尤其随着骨组织工程技术领域的发展,人们利用各种方法对现有的医用支架进行修饰,以提高其生物相容性、骨传导性、生物可降解性等。因此涌现出各种新型骨组织修复材料,这些新型修复材料与天然骨基质具有相似的组成、结构及生物学反应。羟基磷灰石(hydroxyapatite,HA)是天然骨组织中的主要无机成分,具有良好生物相容性、骨传导性、生物可降解性。壳聚糖(Chitosan,CS)具有良好的抗菌性、生物相容性、生物可降解性。将羟基磷灰石和壳聚糖复合得到的支架材料既能克服羟基磷灰石不易塑形、脆性大以及壳聚糖强度低,在湿态环境下损耗过快,又综合了二者的生物活性,更加适合作为骨组织工程中的骨修复材料。但其在体内降解过程并非十分清楚,而且其降解产物对成骨细胞的影响研究也较少,故本实验从此处入手研究。目的:探索研究大鼠成骨细胞与壳聚糖/羟基磷灰石复合多孔生物支架降解产物的生物相容性,通过此项研究,进一步深入了解大鼠成骨细胞与壳聚糖/羟基磷灰石复合多孔生物支架降解产物的生物相容性,证实其降解产物是否影响大鼠成骨细胞的形态、黏附及增殖和正常的生理功能,并对今后临床方面骨质缺损的治疗及骨组织工程领域的相关发展提供可靠依据。方法:通过大鼠成骨细胞的培养及鉴别,以及壳聚糖/羟基磷灰石复合多孔生物支架的降解,将培养的第二代大鼠成骨细胞分别与壳聚糖/羟基磷灰石复合支架降解产物浸提液(实验组)和含10%胎牛血清DMEM培养液(对照组)中培养,培养第2,4,6,8,10天分别对两组细胞做MTT细胞计数,并绘制细胞增殖曲线,采用联合会推荐法测定细胞碱性磷酸酶活性,采用BCA蛋白定量法测定总蛋白。结果:1.将制作好的第2代大鼠成骨细胞切片镜下观察,大鼠成骨细胞传代培养后,细胞形态多样,呈多角形、梭形、树突形等不规则形状,可见细胞核,细胞碱性磷酸酶染色伴随着细胞增殖可见胞浆中出现大量黑色颗粒。2.实验组与对照组大鼠成骨细胞的增殖速度均是在4-6天里增殖最快,为细胞生长的对数期,生长旺盛,前后增殖相对缓慢。实验组的增殖速度明显高于对照组,差异有显著性意义(P<0.05)。3.在壳聚糖/羟基磷灰石复合多孔生物支架降解产物浸提液中培养的大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性、细胞总蛋白合成及碱性磷酸酶与总蛋白的比值明显高于在体积分数为10%胎牛血清DMEM培养液中培养的细胞(P<0.05)。结论:壳聚糖/羟基磷灰石复合多孔生物支架的降解产物不仅促进大鼠成骨细胞的黏附、生长和增殖,还可增强其骨化功能,具有较好的生物相容性,可促进骨组织的改建及完全修复等,而且经济实用,有望成为一种新型骨缺损修复材料而被应用于临床。
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