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胃癌（Gastric cancer,GC）是一种全球性疾病,每年有超过100万的新确诊病例,是全球第五大最常见的癌症和第四大致死癌症。胃癌起源于胃粘膜上皮,它可发生在胃的任何部位,但大半胃癌发生于胃窦部。大部分胃癌属于腺癌,早期症状不明显,与胃炎、胃溃疡等慢性胃病很相似,很难引起重视。因此,导致其早期诊断率很低。目前,晚期胃癌的治疗手段主要为手术切除和放化疗等,但平均5年生存率仍然低于20%。近年来,虽然胃癌的诊断和治疗技术有所提升,但不良的预后仍然是胃癌治疗所面临的问题之一。标准的手术切除并不是晚期胃癌的理想治疗方法,并且多药耐药已经成为放化疗成功的最大障碍。因此,研究和开发新药迫在眉睫。近年来,有关植物天然化合物开发抗肿瘤药物的研究越来越多。去甲泽拉木醛是一种从雷公藤中提取的天然化合物,最初被认为是一种具有免疫抑制和抗炎作用的药物。但近年来,越来越多的研究表明去甲泽拉木醛对多种肿瘤有显著的抑制作用。在黑色素瘤中去甲泽拉木醛靶向MCL1来诱导细胞发生凋亡;还能通过调节mi R-30e-5p/MYBL2轴来抑制胶质瘤的增长。但其在胃癌中的抗肿瘤机制尚不明确。因此研究去甲泽拉木醛对胃癌的影响及其抗肿瘤作用机制是很有必要的。转录因子c-MYC是原癌基因的一种,据报道该因子可与人类基因组中15%的启动子结合。c-MYC的表达和活性由于其在调节细胞通路中的重要作用而受到严格调控。细胞分化、细胞增殖、细胞周期、迁移、侵袭和凋亡均受到c-MYC的部分调控,在肿瘤发生发展中具有重要意义。在大多数人类肿瘤类型中,c-MYC的高表达往往不仅与不良预后相关,而且与多种致癌途径相关。本研究中,Western blot实验表明用去甲泽拉木醛处理胃癌细胞HGC-27和SGC-7901后,c-MYC的表达水平呈剂量依赖性和时间依赖性下降。所以,本文着重于研究去甲泽拉木醛通过调控FBXW7/c-MYC通路来影响胃癌细胞的迁移侵袭。本文主要实验结果如下:1.去甲泽拉木醛抑制胃癌细胞增殖为了探究去甲泽拉木醛对胃癌细胞增殖能力的影响,我们进行了MTT和BrdU实验,发现去甲泽拉木醛能有效地抑制胃癌的细胞增殖能力。我们用流式细胞仪检测细胞周期,发现去甲泽拉木醛诱导胃癌细胞阻滞在G0/G1期,并且G0/G1期相关蛋白CDK4、CDK6和cyclin D1（CCND1）的表达量也明显下降。上述结果表明,去甲泽拉木醛诱导胃癌细胞阻滞在G0/G1期进而抑制其增殖。2.去甲泽拉木醛抑制胃癌细胞的迁移和侵袭为了探究去甲泽拉木醛对胃癌细胞迁移侵袭能力的影响,我们进行了划痕愈合实验和Transwell实验,发现去甲泽拉木醛能够有效地抑制胃癌细胞的迁移和侵袭能力。检测迁移侵袭相关蛋白,发现N-cadherin、MMP9和Vimentin的表达水平显著下调,E-cadherin的表达水平明显上调。上述结果表明:去甲泽拉木醛能够抑制胃癌细胞的迁移侵袭能力。3.去甲泽拉木醛通过调控FBXW7/c-MYC通路抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力c-MYC作为著名的癌基因,与细胞增殖、迁移侵袭等均相关。为了探究去甲泽拉木醛是否通过调控c-MYC进而抑制胃癌细胞增殖、迁移侵袭能力。我们通过Western blot实验发现用去甲泽拉木醛处理胃癌细胞HGC-27和SGC-7901后,c-MYC的表达水平呈浓度依赖性和时间依赖性下降。随后,我们在胃癌细胞中过表达c-MYC,通过MTT、BrdU等实验发现过表达c-MYC后,能够挽救去甲泽拉木醛对胃癌细胞增殖、迁移侵袭的抑制作用。Western blot实验结果表明过表达c-MYC后,G0/G1期相关蛋白CDK4、CCND1和迁移侵袭相关蛋白E-cadherin、MMP9也得到了部分的挽救。为了进一步探究去甲泽拉木醛是如何使c-MYC蛋白下调的,我们进行了qRT-PCR（Quantitative Real-Time PCR）实验,发现c-MYC的mRNA水平在去甲泽拉木醛处理后并没有下降。因此,我们猜测去甲泽拉木醛可能是通过翻译后修饰来调控c-MYC蛋白的表达水平。免疫沉淀实验证明c-MYC蛋白水平的降低是由去甲泽拉木醛所诱导的c-MYC泛素化水平增高所引起的。并且通过qRT-PCR实验和Western blot实验结果表明去甲泽拉木醛是通过上调FBXW7的表达使c-MYC的泛素化水平增高的。以上实验结果表明去甲泽拉木醛通过FBXW7/c-MYC通路抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭。4.去甲泽拉木醛通过下调c-MYC的表达抑制胃癌细胞体内体外成瘤能力为了探究去甲泽拉木醛对胃癌细胞体内体外成瘤能力的影响,我们进行了Soft agar实验和小鼠皮下成瘤实验,结果表明,过表达c-MYC能够挽救去甲泽拉木醛对胃癌体内体外成瘤能力的抑制作用。同时,免疫组化实验结果也证明了上述结论。以上实验结果表明去甲泽拉木醛可以通过下调c-MYC的表达来抑制胃癌细胞的体内体外成瘤能力。5.去甲泽拉木醛增强胃癌细胞对5-氟尿嘧啶和阿霉素的化疗敏感性为了探索去甲泽拉木醛能否增强化疗药物5-氟尿嘧啶（5-Fluorouracil,5-Fu）和阿霉素（Doxorubicin,DOX）的化学敏感性,我们进行了MTT实验,实验结果表明去甲泽拉木醛在体外能够增强5-氟尿嘧啶和阿霉素对胃癌细胞的抑制作用。BrdU实验和平板克隆实验也证明同样的结果。同时,流式细胞仪分析发现去甲泽拉木醛能够增强5-氟尿嘧啶和阿霉素对胃癌细胞的凋亡强度。并且凋亡相关蛋白cleaved-PARP（C-PARP）和cleaved-caspase3（C-Caspase3）均有显著的变化。上述结果表明,去甲泽拉木醛能够增强胃癌细胞对5-Fu和阿霉素的化疗敏感性。综上所述,去甲泽拉木醛通过FBXW7/c-MYC通路抑制胃癌细胞中c-MYC蛋白的表达量,从而抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭以及体内体外成瘤能力。此外,去甲泽拉木醛还可以增强化疗药物5-氟尿嘧啶和阿霉素的化疗敏感性。所以,上述结果证明去甲泽拉木醛具有治疗胃癌的潜力。