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第一部分LMP/TAP基因多态性与乙型肝炎病毒感染转归的关系乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染是一个全球性的问题,严重危害着人类的健康和生活质量。HBV感染人体后可导致不同的临床结局,从自限性感染者、无症状携带者、隐匿性感染者到急性乙型肝炎、慢性乙型肝炎、肝硬化直至肝癌。目前,国内外研究大多集中于HBV本身,认为病毒的不同基因型或病毒基因某些位点的突变是导致感染HBV后产生不同临床转归的原因。事实上,人类感染HBV后,病毒能否被彻底清除、能否发展为慢性化,更大程度上取决于个体的抗病毒免疫水平,而与免疫因素相关的个体遗传背景是影响乙型病毒性肝炎转归的重要因素。HBV感染时,低分子量蛋白酶体(low molecular weight proteasome,LMP)能够水解抗原成为适合的肽段,而抗原处理相关转运体蛋白(transporter associated with antigen processing,TAP)的功能是将胞浆内一部分经蛋白酶体降解后的HBV的抗原片段转运到内质网(ER)腔中,并在此与主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)-Ⅰ类分子结合,进一步被提呈到细胞表面,引起HBV特异性的CD8+ T细胞应答,病毒感染的细胞被溶解或凋亡。如病毒逃避了此条抗原加工递呈通路,则可能造成持续或慢性感染。因此,推测LMP/TAP基因型的改变(多态性)可能与HBV感染转归有关联。【目的】探讨LMP/TAP基因多态性与乙型肝炎病毒感染转归的关系。【方法】采用病例对照研究设计和分子流行病学研究方法,收集江苏省无锡市乙型肝炎感染者356例,其中包括191例HBV持续感染者和165例HBV自限性感染者,并且收集278例与病例生活在同一地区的经性别、年龄频数匹配的健康对照人群。采用限制性片段长度多态性-聚合酶链式反应(PCR-RFLP)方法检测6个TAP基因位点和2个LMP基因位点基因型,盲法判读基因型。采用SAS软件(Version 9.1.3, SAS Institute,Cary,NC)进行统计学分析。以方差分析(One-Way ANOVA)比较对照组、HBV自限清除组和持续感染组三组之间年龄分布的差异,采用χ2检验比较三组之间性别、吸烟和饮酒分布以及Hardy-Weinberg平衡检验。用PHASE 1.0软件构建LMP7-Codon145和TAP-Codon637两个多态性位点所组成的单体型。基因多态性与HBV不同临床结局之间的关联以比值比(odds ratio,OR)及其95%可信区间(confidence interval,CI)表示,采用非条件Logistic回归模型分析,调整年龄、性别等混杂因素的影响。【结果】对照组、HBV持续感染组和自限清除组之间的年龄、性别构成差异无统计学意义(F=0.36,P=0.697;χ2=2.29,P=0.319),三组之间吸烟、饮酒频率分布差异有统计学意义(χ2=36.89,P<0.001;χ2=14.55,P=0.006)。对照组TAP和LMP基因各SNP位点基因型频率分布均符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05),说明具有人群代表性。在调整年龄和性别后,LMP7-Codon145位点多态性在对照组与HBV持续感染组之间:Gln/Gln→Gln/Lys基因型频率比较,差异有统计学意义(OR=2.04, 95%CI=1.36-3.05,P=0.001);Gln/Gln→Lys/Lys基因型频率的比较,差异有统计学意义(OR=2.69,95%CI=1.27-5.69,P=0.010)。TAP-Codon637位点多态性在对照组与HBV持续感染组之间:Asp/Asp→Asp/Gly基因型频率比较,差异有统计学意义(OR=1.95,95%CI=1.31-2.90,P=0.001);Asp/Asp→Gly/Gly基因型频率的比较,差异有统计学意义(OR=3.55,95%CI=1.57-8.02,P=0.002)。在调整年龄和性别后,LMP7-Codon145位点多态性在HBV自限清除组与持续感染组之间:Gln/Gln→Gln/Lys基因型频率比较,差异有统计学意义(OR=2.60,95%CI=1.62-4.17,P<0.001);Gln/Gln→Lys/Lys基因型频率的比较,差异有统计学意义(OR=2.65,95%CI=1.12-6.24,P=0.026)。TAP-Codon637位点多态性在HBV自限清除组与持续感染组之间:Asp/Asp→Asp/Gly基因型频率比较,差异有统计学意义(OR=1.88,95%CI=1.19-3.00,P=0.007);Asp/Asp→Gly/Gly基因型频率的比较,差异有统计学意义(OR=2.76,95%CI=1.09-6.98,P=0.032)。单体型分析结果显示,调整年龄和性别后,在健康对照组与持续感染组之间:A→B、A→C、A→D单体型频率比较,差异均有统计学意义(OR=2.26,95%CI=1.62-3.15,P<0.001;OR=2.37,95%CI=1.69-3.32,P<0.001;OR=4.38,95%CI=1.78-10.77,P=0.001);在HBV自限清除组与持续感染组之间:A→B、A→C、A→D单体型频率比较,差异也均有统计学意义( OR=2.68 ,95%CI=1.81-3.98,P<0.001;OR=2.40,95%CI=1.62-3.55,P<0.001;OR=3.03,95%CI=1.22-7.55,P=0.017)。【结论】TAP1-Codon637和LMP7-Codon145位点多态性可能与乙型肝炎感染转归有显著关联,可显著增加乙型肝炎持续感染的风险。第二部分LMP/TAP基因多态性与吸毒人群丙型肝炎病毒感染转归的关系丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)感染是常见的血源性传播疾病,世界范围内约有1.7亿HCV感染者。大部分(70%～80%)HCV感染者为持续感染,并且约30%的持续性感染者发展成慢性肝病,包括肝硬化和肝细胞癌。环境、病毒和宿主因素与丙型肝炎病毒清除能力相关联,另外有关联性研究表明,一个强有力的抗HCV宿主免疫反应有利于病毒清除。因此,人体遗传基因的变异可能与HCV清除能力有关。低分子量蛋白酶体(LMP)基因存在于MHC-Ⅱ类区域内,是影响抗原加工与呈递的重要基因之一,其编码的蛋白LMP2与LMP7组成的二聚体,对于抗原肽的降解有着重要的作用。HCV感染时,细胞毒性T细胞(CD8+ T细胞/CTL)反应起很重要的作用。被感染细胞胞浆内的抗原经LMP降解后,一部分经TAP从胞浆转运到内质网腔中,并在此与MHC-Ⅰ类分子结合,进一步被提呈到细胞表面,引起HCV特异性的CD8+ T细胞应答。TAP蛋白是由TAP1和TAP2蛋白组成的异二聚体,人类TAP基因位于第六号染色体短臂HLA-Ⅱ区,包括TAP1和TAP2基因,人类TAP基因的部分多态性位点已被证实。因此,推测LMP/TAP的基因型改变(多态性)可能与HCV感染转归有关联。【目的】探讨LMP/TAP基因多态性与吸毒人群丙型肝炎病毒感染转归的关系。【方法】本研究对象为南京市强制戒毒所强制戒毒人员587名。根据抗-HCV抗体检测及HCV RNA检测结果分为HCV感染组(362人)和HCV阴性的对照组(225人),其中362例感染组中包括173例HCV持续感染者和189例HCV自限性清除者,并且HCV阴性对照组与HCV感染组之间,根据地区、性别、年龄进行频数匹配。采用扩增阻滞突变体系-聚合酶链式反应(AmplificationRefractory Mutation System-Polymerase Chain Reaction ,ARMS-PCR)法检测6个TAP基因位点基因型,采用限制性片段长度多态性-聚合酶链式反应(PCR-RFLP)方法检测两个LMP基因位点基因型,盲法进行基因型的判读。采用SPSS13.0软件进行统计学分析。以方差分析(One-Way ANOVA)比较对照组、HCV自限清除组和持续感染组3组之间年龄分布的差异,以χ2检验比较3组之间性别、静脉注射吸毒分布差异以及Hardy-Weinberg平衡检验。用PHASE 2.0软件分别构建TAP1和TAP2 SNPs位点组成的单体型。基因多态性与HCV不同临床结局之间的关联以比值比(odds ratio,OR)及其95%可信区间(confidence interval,CI)表示,采用非条件Logistic回归模型分析,调整年龄、性别、静脉注射等混杂因素的影响。【结果】对照组、HCV持续感染组和自限清除组之间的年龄、性别构成差异无统计学意义(F=0.78,P=0.457;χ2=0.89,P=0.639),3组之间静脉吸毒频率分布差异有统计学意义(χ2=149.81,P<0.001)。对照组TAP和LMP基因各SNP位点基因型频率分布符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05),说明具有人群代表性。在调整年龄和性别后,TAP-Codon379位点多态性在对照组与HCV自限清除组之间:Val/Val→Val/Ile基因型频率比较,差异有统计学意义(OR=2.05, 95%CI=1.20-3.51,P=0.009);TAP-Codon379位点多态性在对照组与HCV持续感染组之间:Val/Val→Val/Ile基因型频率比较,差异有统计学意义(OR=1.91, 95%CI=1.13-3.24,P=0.016)。LMP7-Codon145位点多态性在对照组与HCV持续感染组之间:Gln/Gln→Gln/Lys基因型频率比较,差异有统计学意义(OR=1.91,95%CI=1.17-3.11,P=0.010);Gln/Gln→Lys/Lys基因型频率的比较,差异有统计学意义(OR=2.99,95%CI=1.20-7.50,P=0.019)。TAP-Codon637位点多态性在对照组与HCV持续感染组之间:Asp/Asp→Asp/Gly基因型频率比较,差异有统计学意义(OR=2.07,95%CI=1.25-3.44,P=0.005);Asp/Asp→Gly/Gly基因型频率的比较,差异有统计学意义(OR=2.94,95%CI=1.16-7.46,P=0.024)。在调整年龄和性别后,LMP7-Codon145位点多态性在HCV自限清除组与持续感染组之间:Gln/Gln→Gln/Lys基因型频率比较,差异有统计学意义(OR=1.67,95%CI=1.07-2.62,P=0.025);Gln/Gln→Lys/Lys基因型频率的比较,差异有统计学意义(OR=2.39,95%CI=1.09-5.24,P=0.030)。TAP-Codon637位点多态性在HCV自限清除组与持续感染组之间:Asp/Asp→Asp/Gly基因型频率比较,差异有统计学意义(OR=1.64,95%CI=1.04-2.59,P=0.033);Asp/Asp→Gly/Gly基因型频率的比较,差异有统计学意义(OR=3.13,95%CI=1.30-7.55,P=0.011)。单体型分析结果显示,在对照组与HCV自限清除组之间:TAP2A→H、TAP2A→K单体型频率比较,差异均有统计学意义(OR=2.43,95%CI=1.29-4.58,P=0.006;OR=2.69,95%CI=1.06-6.80,P=0.037);在对照组与HCV持续感染组之间:TAP1A→B、TAP1A→D、TAP2A→E、TAP2A→H单体型频率比较,差异均有统计学意义(OR=3.81,95%CI=1.92-7.58,P<0.001; OR=1.91,95%CI=1.20-3.02,P=0.006;OR=2.08,95%CI=1.09-3.98,P=0.027;OR=2.38,95%CI=1.31-4.32,P=0.004);在HCV自限清除组与持续感染组之间:TAP1A→B、TAP1A→D单体型频率比较,差异也均有统计学意义( OR=2.05 ,95%CI=1.19-3.54,P=0.010;OR=1.58,95%CI=1.04-2.41,P=0.034)。【结论】TAP2-Codon379位点多态性可能与HCV感染有着显著的易感关联,TAP1-Codon637和LMP7-Codon145位点多态性可能与丙型肝炎感染转归有显著关联,可显著增加丙型肝炎持续感染的风险。