【摘 要】
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LEA基因作为植物种子成熟和发育阶段表达的一类家族基因,在植物受到干旱、低温、盐渍等环境胁迫后造成脱水的营养组织中也有表达,继而引起LEA蛋白的高度富集并提高植物的抗逆
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LEA基因作为植物种子成熟和发育阶段表达的一类家族基因,在植物受到干旱、低温、盐渍等环境胁迫后造成脱水的营养组织中也有表达,继而引起LEA蛋白的高度富集并提高植物的抗逆性。已有大量研究表明将外源LEA基因在拟南芥、烟草等植物中过量表达,可以显著提高其抵抗非生物胁迫的能力。因此,本研究团队将来自柽柳(Tamarix androssowii)的TaLEA基因转入山新杨基因组,获得了卡那霉素抗性株系。对其中6个山新杨转基因株系进行PCR分子检测,结果显示均为阳性,在此基础上又进行Northern杂交,各株系均出现杂交谱带,说明外源基因可以在RNA水平上表达。以6个转TaLEA基因山新杨和非转基因山新杨为试材,分别测定了0.8%的NaCl办迫下各株系的相对高生长、存活率、叶绿素荧光动力学参数、叶片中Na+含量;也测定了0.6%的NaHCO3碱性盐胁迫下各株系的绝对高生长量、绝对地径生长量、存活率、盐害指数、光合参数、叶绿素荧光动力学参数,通过NBT染色和DAB染色,观察各株系在碱性盐胁迫下的超氧阴离子及过氧化氢的累积情况,进而分析转基因株系的耐碱性。结果表明:NaCl胁迫后转基因株系的复水成活率均高于NT,4个转基因株系的相对生长高于NT,NaCl胁迫12d时转基因SL2株系的Fv/Fm、qP、ΦPSⅡ的降幅最小,且NPQ的升幅最小。转基因株系的嫩叶中Na+离了较对照低,而黄叶和枯萎叶中Na+离子较对照高,暗示转基因山新杨可以通过将Na+离子运输到老的组织中并通过老化组织的离体而降低整体的Na+离子含量。抗NaCl胁迫能力强弱依次为SL2、SL1、SL5、SL6、 SL3、SL4、NT。其中SL2为耐盐能力显著提高的转基因山新杨,在0.8%的NaCl胁迫下,该株系相对高生长达到48.70%,较NT高31.02%,复水后成活率为66.67%,是NT的5倍。0.6%NaHCO3处理20天后,转基因株系的平均苗高和地径的绝对生长量分别较对照提高22.28%、11.98%;平均碱害指数为0.24,低于对照的0.79:平均存活率为85%,是对照的近3倍。各转基因株系的Pn、Tr均高于NT,SL2和SL5的Gs高于NT,而NT的Ci略微下降,SL2和SL5略微上升。各转基因株系的Fv/Fm平均为0.68,NT只有0.45,前者的qP和φPsⅡ只略高于后者,后者的NPQ却是前者的6倍,在相同的碱胁迫环境下,转基因山新杨,尤其是SL2和SL5,能保持较强的光合能力。NBT染色和DAB染色结果表明,转基因株系的ROS水平较低。抗NaHCO3胁迫能力强弱依次为SL2、SL5、 SL1、SL3、SL6、SL4、NT。
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