《中国药典》石榴皮、石榴子质量标准增修订研究

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石榴皮为石榴科植物石榴Punica granatum L的干燥果皮,是2015版《中国药典》科研任务修订品种,原收载于《中国药典》2010年版,其质量标准中【含量测定]项下只规定了石榴皮总鞣质含量不得低于10.0%,缺乏特异性和特征性成分的量化指标。石榴子(藏文名“赛朱”,(?)),为石榴科植物石榴Punica granatum L的干燥成熟种子,是2015版《中国药典》科研任务新增品种,原收载于《卫生部药品标准·藏药》(第一册),其标准仅有性状描述,导致石榴子药材及其复方制剂缺乏质量评价依据。因此本文对石榴皮、石榴子的质量标准进行研究,为石榴皮、石榴子药材及其复方制剂的质量控制提供科学依据。目的:1.建立DNA条形码鉴定石榴皮和石榴子药材的新方法,鉴定石榴皮、石榴子药材基原。2.完善中药石榴皮质量标准,建立藏药石榴子质量标准,保证石榴皮、石榴子临床用药的有效性和安全性。方法:1.采用MEGA5.1软件,分析石榴皮、石榴子药材ITS2、psbA-trnH序列的种内变异程度,并且根据K2P计算其遗传距离,采用NJ法分别构建石榴的ITS2和psbA-trnH序列系统聚类树。2.采用HPLC法测定石榴皮、石榴子药材中的鞣花酸含量。3.采用显微鉴定和TLC鉴别方法鉴别石榴子药材。4.按2010年版《中国药典》一部附录方法测定石榴子药材的灰分、水分、酸不溶性灰分和浸出物含量。结果:1.石榴皮、石榴子DNA条形码鉴定:29批石榴样本所得的ITS2、psbA-trnH序列与GeneBank数据库B1AST序列的相似度达均达99%;iTS2序列长度为244bp,种内无变异,psbA-trnH序列长度为405-409bp,具有2个单倍型,样品序列的K2P遗传距离范围为0-0.0025,平均K2P遗传距离为0.0002;从以ITS2、psbA-trnH序列为基础构建的系统聚类树中可以看出,石榴与外类群能明显的区分开,单系性良好。2.石榴皮质量标准:建立了石榴皮中鞣花酸的HPLC含量测定方法,确定了石榴皮中鞣花酸的含量限度(按干燥品计算,鞣花酸≥0.45%),完善了石榴皮质量标准。3.石榴子质量标准:确定了石榴子性状特征和显微特征:建立了石榴子的薄层鉴别方法;测定了10批石榴子水分、总灰分、酸不溶性灰分及浸出物溶物含量,并确定了相应的限度要求(水分≤16.0%、总灰分≤4.0%、酸不溶性灰分≤1.0%、浸出物≥42.0%);建立了石榴子中鞣花酸的HPLC含量测定方法,确定了石榴子中鞣花酸的含量限度(按干燥品计算,鞣花酸≥10.07%);建立了石榴子的质量标准。结论:1. ITS2、psbA-trnH序列能作为DNA条形码对石榴皮、石榴子药材基原进行鉴定,且该方法稳定、操作简单、重复性好。2.研究建立的石榴皮、石榴子质量标准具有一定的专属性和可控性,提高了石榴皮、石榴子及其复方制剂的质量控制水平。
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