论文部分内容阅读
目的:首先观察蒿甲醚在体外对U251人脑胶质瘤细胞增殖的影响,随后建立SCID小鼠人脑胶质瘤原位模型,观察蒿甲醚在体内对胶质瘤的抑制及其抗血管生成的作用,探讨蒿甲醚抑制胶质瘤增殖的机制,为胶质瘤的临床治疗提供一种新的思路和方法。方法:1.体外细胞基中培养人脑U251胶质瘤细胞,采用MTT(四甲基偶氮唑蓝)法测定蒿甲醚对U251胶质瘤细胞的生长抑制作用,并计算半数抑制浓度(IC50);采用ELISA法检测蒿甲醚抑制U251胶质瘤细胞的VEGF表达。2.构建SCID小鼠人脑胶质瘤原位模型,采用立体定位仪定位麻醉状态小鼠,剪开头皮后,在距矢状缝与冠状缝交点处分别向右向后2mm定位注射点,钻孔后,使用10ul微量注射器垂直于颅骨在小鼠脑部定位点(右侧顶叶区)深5mm处,注入10ulU251人脑胶质瘤细胞,骨蜡填封骨孔,可吸收线缝合头皮,观察小鼠生活状态,在小鼠出现癫痫症状后,经活体左心室灌注后取脑组织肉眼观察肿瘤大体外观及切面,并行HE染色确证肿瘤模型成功构建。3.构建24只SCID小鼠U251人脑胶质瘤原位模型,随机分为3组,分别为对照组(生理盐水0.4ml/10g/d)、蒿甲醚组(蒿甲醚50.0mg/kg/d)、替莫唑胺组(20mg/kg/d)。替莫唑胺采用其粉剂制成混悬液灌胃,量为1.65mg/只/d。接种后标记小鼠,每天定时定量给药,并记录生存时间。约接种20天后,当SCID小鼠濒临死亡时行活体左心灌注,取出并固定全部脑组织,分别行肉眼观察、HE切片染色、免疫组化,证实SCID小鼠胶质瘤情况。结果:1.蒿甲醚可抑制人脑U251胶质瘤细胞增殖,其抑瘤作用呈时间和剂量依赖性;蒿甲醚作用后的U251胶质瘤细胞上清液中VEGF含量和生理盐水组相比明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。2.成功构建SCID小鼠U251人脑胶质瘤原位模型,经活体左心灌注后取脑组织发现均有肿瘤生长。3.蒿甲醚组和替莫唑胺组SCID小鼠的中位生存期较对照组有明显延长(P<0.05);脑组织HE切片染色可见对照组的U251细胞核大深染,呈梭型或不规则形,高倍镜下可见U251细胞向正常脑组织浸润,蒿甲醚组及替莫唑胺组肿瘤细胞密集程度均明显低于对照组。结论:1、蒿甲醚可抑制人脑U251胶质瘤细胞增殖,其抑瘤效应呈剂量-时间依赖性。2、蒿甲醚可能通过抑制VEGF表达而发挥其抗肿瘤作用。3、蒿甲醚可抑制SCID小鼠颅内胶质瘤增殖。