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该文通过同源重组的方法,缺失了甜菜夜蛾核多角体病毒(Spodopteraexigua multicapsid nucleopolyhedrovirus,SeMNPV)基因组中的非必需基因--脱皮甾体尿苷二磷酸葡萄糖基转移酶基因(ecdysteroid UDP glucosyl transferase,egt),并将绿色荧光蛋白基因(green fluorecentprotein,gfp)整合在egt基因位点,构建得到了重组病毒SeLV1.然后对其进行了进一步的鉴定分析,为继续构建高效的重组杆状病毒杀虫剂提供了重要的技术基础.在野生型SeMNPV中存在缺失了不同片断的多种基因型.为了构建重组病毒SeLV1,首先通过虫体克隆的方法,从SeMNPV的野外分离株SeUS1中分离得到了具有SeMNPV完整基因组的基因型克隆--SeC,用多种限制性内切酶对其基因组进行REN分析,所得的酶切图谱中均无亚克分子带出现,证明其具备了完整的病毒基因组.为了便于筛选分离重组病毒,将报告基因gfp插入到egt基因的上下游侧翼序列之间,并以克隆载体pUC18为基础,构建成转移载体pEGT-GFP<+>.为确保基因能顺利表达,还在其起始密码子ATG前插入了苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californica multicapsid nucleopolyhedrovirus,AcMNPV)的多角体基因的启动子.用构建好的转移载体pEGT-GFP<+>和具有完整基因组的SeC的DNA,通过脂质体法共转染Se301细胞.在荧光显微镜下可以观察到部分被感染的细胞有绿色荧光产生,证明重组成功.在GFP筛选标记的帮助下,利用空斑纯化法分离得到了重组病毒SeLV1.对其基因组进行的REN和Southern blot分析证明gfp基因已经成功地整合在egt基因位点,但同时在原来Pst I-C片断上发现存在6.9kb的缺失.通过透射电镜发现SeLV1的多角体大小不均一,和SeC的多角体存在较大差异.口服感染甜菜夜蛾幼虫的实验证明,SeLV1已经失去了对甜菜夜蛾幼虫的口服感染毒性,但对SeLV1和SeC的混合病毒进行的生物测定发现,其混合感染后的毒力相对于SeC有所提高.