【摘 要】
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目的:内皮功能障碍是动脉粥样硬化的早期和中心特征。Humanin（HN）是一种新兴的内源性表达的细胞保护肽,在神经细胞中具有抗凋亡的特性。内皮细胞微粒（EMPs）被认为是重要的细胞通讯介质,通过向靶细胞转移核酸、蛋白质等物质来调控各种生理和病理过程。本研究旨在探讨EMPs及其携带的（microRNA-155）miR-155在HN衍生物[Gly14]-humanin（HNG）抗高糖诱导的血管内皮细胞
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目的:内皮功能障碍是动脉粥样硬化的早期和中心特征。Humanin（HN）是一种新兴的内源性表达的细胞保护肽,在神经细胞中具有抗凋亡的特性。内皮细胞微粒（EMPs）被认为是重要的细胞通讯介质,通过向靶细胞转移核酸、蛋白质等物质来调控各种生理和病理过程。本研究旨在探讨EMPs及其携带的（microRNA-155）miR-155在HN衍生物[Gly14]-humanin（HNG）抗高糖诱导的血管内皮细胞凋亡中的作用及体内实验验证HNG对糖尿病小鼠血管的保护。方法:采用体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVECs）,用30 mM葡萄糖（HG）处理HUVECs 72 h构建体外细胞培养模型,1 μM HNG进行药物干预,30 mM甘露醇作为渗透压对照;采用细胞免疫荧光观察HN在细胞内表达情况;采用qRT-PCR方法检测细胞内HN mRNA及miR-155的表达;采用流式细胞术检测细胞凋亡;采用超速离心法提取EMPs;使用电镜、激光共聚焦显微镜鉴定EMPs;将6周龄雄性C57BL/6小鼠腹腔注射链脲佐菌素（STZ）构建糖尿病小鼠模型,造模成功后腹腔注射HNG 16周之后取主动脉弓包埋切片,进行HE染色;采用western blotting方法检测血管中凋亡蛋白的表达。结果:1.细胞免疫荧光结果显示HN可以在HUVECs中表达;qRT-PCR结果显示,高糖能显著抑制细胞中HN mRNA的表达。2.流式细胞术结果显示,外源性给予HNG干预能明显抑制高糖诱导的细胞凋亡;HNG干预下产生的EMPs诱导的内皮细胞凋亡较高糖条件明显减少。3.qRT-PCR结果显示,HNG减少高糖诱导的EMPs中miR-155的表达;提取过表达miR-155的EMPs,与HUVECs共孵育,可明显增加内皮细胞凋亡。4.高糖条件下,提取过表达miR-155的EMPs与HUVECs共孵育,细胞凋亡进一步增加;与高糖条件下过表达miR-155提取的EMPs相比,加入HNG干预后提取的EMPs与HUVECs共孵育,细胞凋亡减少。5.动物实验结果显示,腹腔注射HNG 16周的糖尿病小鼠体重较糖尿病小鼠增加缓慢,血糖水平明显低于糖尿病小鼠。6.Western blotting结果示,糖尿病小鼠血管中cleaved caspase-3、BAX蛋白表达增加,BCL-2蛋白表达减少;HNG能减少糖尿病小鼠血管中的cleaved caspase-3、BAX蛋白水平,增加其BCL-2蛋白水平;HE结果显示,HNG明显减小动脉斑块面积。结论:高糖抑制HN mRNA表达;外源补充HNG后,高糖诱导的内皮细胞凋亡减少;HNG通过抑制EMPs中miR-155的表达发挥抗细胞凋亡作用;HNG抑制糖尿病小鼠血管凋亡蛋白的表达,抑制糖尿病小鼠动脉粥样硬化斑块面积发挥保护作用。
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