Rab GTPase蛋白是小分子GTP结合蛋白(small GTP-binding proteins)中最大的亚家族，它调节和控制细胞器之间的膜通讯。Rab蛋白作为囊泡运输的分子开关，与其上游调控因子和下游特定的效应子相互作用，在囊泡的形成、转运、粘附、锚定、融合等过程中起重要作用。然而，Rab GTPase蛋白在免疫系统中的作用有待于深入研究。　　 本实验室前期研究表明，Rab蛋白超家族成员Rab6参与对虾抗病毒免疫的一条可能途径是，通过与β-actin的互作，调控对虾血细胞的吞噬活性。因为日本对虾和模式生物果蝇同属于节肢动物门，且它们的Rab6蛋白同源性达到90.47％，所以可以使用果蝇S2细胞模拟虾血细胞的吞噬过程，来研究其对果蝇C病毒(DCV)的吞噬过程，进而获得对于Rab6蛋白在无脊椎动物抗病毒细胞吞噬中作用的认识。　　 为了了解Rab6蛋白在果蝇细胞吞噬中的作用，我们采用具有吞噬能力的果蝇S2细胞进行试验。首先，我们需要证明S2细胞中Rab6蛋白能够表达，所以我们制备Rab6的特异性抗体，再进行Western Blot分析，结果表明Rab6蛋白在S2细胞中能够正常表达。根据本试验室对虾研究结果，Rab6蛋白通过与β-actin蛋白互作调控吞噬，因此本研究构建Rab6与actin的重组表达质粒，并将这2种质粒共转染S2细胞，随后进行免疫共沉淀试验，结果显示在S2细胞中Rab6蛋白与actin蛋白存在相互作用。这表明Rab6蛋白可能通过与actin蛋白互作参与细胞吞噬。　　 为了进一步认识Rab6蛋白对细胞吞噬中的调控作用，一方面，我们在果蝇S2细胞中采用RNA干扰技术敲低Rab6基因的表达，Real-time PCR和Western blot检测Rab6基因转录和翻译的结果表明，Rab6特异的siRNA作用后，Rab6 mRNA和Rab6蛋白表的达水平大幅度降低；此时使用灭活的FITC标记的DCV病毒进行吞噬活性的检测，发现在Rab6蛋白表达被抑制的条件下，细胞的吞噬活性大幅度降低。另一方面，我们使用转染重组表达质粒的方法使Rab6基因上调表达，结果发现Rab6蛋白的转录和翻译水平显著升高，DCV病毒的吞噬试验表明S2细胞的吞噬活性随着Rab6蛋白的表达水平升高而上升。在上述试验的基础上，本研究采用共转染Rab6特异的siRNA(抑制S2内源Rab6的表达)和合同义突变Rab6基因的表达质粒(缺乏Rab6-siRNA的作用位点，产生外源Rab6蛋白)到S2细胞，结果发现Rab6的转录和翻译水平均恢复到正常水平，此时S2细胞的吞噬活性也恢复到正常水平。以上结果说明Rab6蛋白确实能够调控S2细胞的吞噬活性。　　 为了研究Rab6蛋白调控细胞吞噬后的抗病毒作用，本研究对具有感染能力的DCV病毒对S2细胞感染后的感染复数(MOI)进行检测。结果表明，在Rab6蛋白的表达被抑制时，被病毒感染的S2细胞内的DCV浓度较未被抑制的对照组上升；当Rab6表达上调时，DCV的浓度较对照组下降；而干扰内源Rab6表达然后导入外源的Rab6后，细胞内的DCV浓度较对照组降低。以上结果证明Rab6蛋白具有调控细胞抗病毒吞噬的功能。　　 为了观察Rab6蛋白参与S2细胞吞噬病毒的整个过程，我们使用荧光染料标记Rab6-actin蛋白复合体，并使用激光共聚焦显微镜进行观测。结果表明，在从吞噬开始发生到病毒被吞入细胞内的整个过程中，细胞吞噬病毒的部位，Rab6蛋白的表达量显著上升，证明Rab6蛋白确实能够参与细胞的抗病毒吞噬，发挥重要作用。　　 综上所述，Rab蛋白超家族成员Rab6能够调控果蝇的细胞吞噬，具有抗病毒作用。