汞—富T寡核苷酸和镉配合物检测金属硫蛋白的新方法研究

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金属硫蛋白(Metallothioneins, MTs)具有重要的生物学功能,诸如清除自由基、重金属解毒、抗电离辐射及抑制细胞凋亡等。此外,金属硫蛋白还可作为环境中重金属污染的生物标志物。因此,建立简便、灵敏、快速、实用的金属硫蛋白的检测新方法不仅对于环境污染的监测、评价,而且对于MTs生物学功能的研究都具有重要意义。本文第二章建立了基于Hg-富T寡核苷酸和金纳米比色法检测MTs的新方法。在pH=8.0的B-R缓冲溶液中,Hg2+与富T寡核苷酸(TRO)形成T-Hg2+-T复合物,加入MTs后,MTs可与T-Hg2+-T复合物中的Hg2+结合,释放出TRO,且吸附在AuNPs表面上,导致体系的颜色发生改变。据此建立了比色传感测定MTs的新方法。在优化的实验条件下,MTs的浓度为2.56×10-8–3.39×10-7mol·L1时,体系的(A620/A520)与MTs浓度有良好的线性关系,且体系颜色发生由蓝到红变化,可用裸眼进行定量测定。回归方程为(A620/A520)=0.092+0.242c(×10-7mol·L1),r=0.9841,检出限为7.67×10-9mol·L-1。该方法操作简便、快速、灵敏、成本低,已成功应用于尿样中痕量MTs的测定。本文第三章基于8-羟基喹啉-5-磺酸(HQS)-镉配合物,建立了荧光猝灭法测定尿样中MTs的新方法。实验发现,在B-R缓冲溶液及阳离子表面活性剂十六烷基三甲基溴化胺(CTMAB)存在时,镉离子(Cd2+)与8-羟基喹啉-5-磺酸形成HQS-Cd2+配合物,加入MTs后可使HQS-Cd2+配合物的荧光强度显著减弱。据此建立了一种测定尿液中MTs的荧光猝灭新方法。在最佳的实验条件下,体系的最大荧光峰位于524nm。MTs的浓度在3.12×10-8–1.23×10-6mol·L1范围内与体系的荧光强度变化值呈良好线性关系,线性回归方程为ΔF=12.79+20.20c (×10-7mol·L1),r2=0.9919,检出限为9.36×10-9mol·L1。该方法简便快速,灵敏度高,选择性好,用于尿样中MTs的测定,结果满意。本文第四章研究了8-羟基喹啉-5-磺酸-镉配合物与金属硫蛋白的反应机制。结果表明,HQS-Cd(II)配合物与MTs的相互作用主要由疏水作用力驱动,形成的HQS-Cd(Ⅱ)-MTs复合物中,HQS-Cd(Ⅱ)和MTs的结合比为11.9:1。依据Stern-Volmer方程和荧光寿命测定获得的结果,推测HQS-Cd(Ⅱ)配合物的荧光被MTs猝灭的过程主要是一个静态猝灭过程。
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