斑玉蕈(Hypsizgus marmoreus),又名蟹味菇、真姬菇,是重要的工厂化生产食用菌之一。菌种是食用菌产业持续健康发展的基础。然而,由于斑玉蕈栽培周期长,一旦工厂化生产遇到劣质菌种,通常出菇时才能被发现,会给食用菌企业带来巨大的损失。因此,寻求快速、简便的斑玉蕈菌种质量评价方法愈显迫切。本课题组此前对斑玉蕈正常菌株和退化菌株研究发现,它们具有不同的使合成染料褪色的能力,可在14天内获得结果,显示的颜色与产量相关性达到0.880;并证明了该方法显色结果与菌盖直径、菌盖厚度、菌柄长度、菌柄直径等质量相关农艺性状存在相关性。本研究拟进一步探寻斑玉蕈菌种质量液体培养评价方法的作用机理,并优化基于该技术的试剂盒生产工艺。跟踪优劣2个分别显色为黄色(SIEF3132)和蓝色(SIEF3246)的斑玉蕈菌株液体培养过程中相关生理指标变化情况,分析这些指标与显色的相关性;应用透析、薄层层析、气相色谱质谱联用技术等分离分析手段,研究比较了优劣菌株发酵液中和溴百里酚兰作用显色的活性物质的差异;对优劣菌株发酵液中皂苷与溴百里酚兰的显色进行分析;优化并确立了生产斑玉萆菌种质量检测试剂盒的工艺参数,具体结果如下:1.对优劣2个分别应用乳糖溴百里酚蓝液体培养(LBL)菌种评价方法显色为黄色(SIEF3132)和蓝色(SIEF3246)的斑玉蕈菌株进行了液体显色培养,跟踪了培养过程中615nm处吸收峰值、酸碱度、电导率和菌丝体生物量、乳糖的变化情况,并分析了它们之间的相关性,并对使BTB变色的活性物质进行了作用位置的定位。结果显示:显示黄色的优质菌株,pH、电导率变化小、代谢乳糖能力强;显示蓝色的劣质菌株,pH、电导率变化大、代谢乳糖的能力弱;使溴百里酚蓝变色的活性物质分泌到细胞外,在胞内没有发现活性。2.通过透析、薄层层析、气相色谱质谱联用技术等分离手段探究了斑玉萆发酵液中与溴百里酚兰作用的活性物质的性质。结果显示,乳糖溴百里酚蓝液体培养(LBL)菌种评价方法评价显黄色的优质斑玉蕈菌株(SIEF3132)发酵液中含有和BTB作用显黄色的活性物质且分子量小于1000;乳糖溴百里酚蓝液体培养(LBL)菌种评价方法评价显蓝色的劣质斑玉蕈菌株(SIEF3246)发酵液中不含有和BTB作用显黄色活性物质或活性物质含量很少;优质菌株和劣质菌株的发酵液中挥发性成分有明显差异:优质菌株醛类含量(74.138%)明显高于劣质菌株(50.352%),而劣质菌株醇类(16.680%)、呋喃(8.379%)、烯烃(6.813%)、苯类(6.265%)、酯类(4.620%)含量较高,均高于SIEF3132优质菌株的。3.使用正丁醇萃取法对显色为黄色(SIEF3132)和蓝色(SIEF3246)的斑玉蕈菌株发酵液中的皂苷进行提取,并对优劣两菌株发酵液中的皂苷含量进行比较。结果表明,提取的总皂苷可以和溴百里酚兰反应显黄色,且优质菌株发酵液中的皂苷含量(1.354g/100ml)高于劣质菌株(1.013g/100ml)的。4.开发了 一种基于乳糖溴百里酚蓝液体培养(LBL)菌种评价方法的斑玉蕈菌种检测试剂盒。确定了试剂盒的主要成分的分装方法:乳糖、蛋白胨、酵母提取物使用液体分装体系,1.5ml离心管中分装的量分别为0.25g、0.375g、0.225g;对于难溶于水的BTB,先溶于稀碱溶液,然后进行分装,1.5ml离心管中分装的量为1.25×10-3g。对试剂盒的一致性和稳定性进行测试结果表明:在3个月内,试剂盒在4℃下可稳定储存;试剂盒的批间和批内重复性良好。并制作了用于检测培养基pH判定的比色卡和结果判定的A615值拟合方程,并对试剂盒的包装进行设计,不同试剂使用不同颜色盖子的离心管进行区分。