杜仲属于杜仲科杜仲属,是我国名贵中药材,也是一种重要的胶原树种。杜仲胶具备绝缘性、耐酸碱及耐腐蚀等多种优良性能,具有重要的开拓前景。目前研究普遍认为橡胶颗粒的膜蛋白包括橡胶延长因子、小橡胶颗粒蛋白和橡胶转移酶等,这些重要的组成部分均参与橡胶的生物合成。橡胶延长因子在异戊烯链的延长以及橡胶分子聚合的过程中起着重要作用。本研究利用基因工程技术,以蒲公英为材料,成功建立了再生体系及遗传转化体系,并将杜仲Eu REF1基因导入到蒲公英中,研究Eu REF1对转基因蒲公英植株表型和橡胶含量的影响。取得主要结果如下:1、本研究选用蒲公英叶片为外植体,成功建立了蒲公英的再生体系。诱导外植体不定芽再生的最佳培养基为MS+1.5 mg·L^-1 6-BA+0.2 mg·L^-1 NAA,其最大诱导率为91.11±3.85%;通过对再生不定芽进行生根诱导,得到最佳生根诱导培养基为1/2 MS+0.4 mg·L^-1 NAA,其最大诱导率为92.41±0.23%。2、本研究确立了农杆菌介导的叶盘转化法进行遗传转化的方法:卡那霉素对蒲公英芽再生的最佳选择压为50 mg·L^-1,对再生芽生根的最佳选择压为25mg·L^-1;当叶片外植体预培养时间为24 h、根癌农杆菌LBA 4404的菌液OD₆₀₀浓度为0.6左右时,进行持续侵染外植体15 min、乙酰丁香酮的浓度为100μmol·L^-1且外植体共培养时间为48 h时,抗性芽的诱导率最高;遗传转化过程中,选择替门汀作为抑菌剂,浓度为150 mg·L^-1。3、本研究首先采用GUS组织化学染色及基因组PCR对抗性植株进行检测,证明杜仲Eu REF1基因已成功整合到蒲公英基因组中,并获得了含杜仲Eu REF1基因的转基因蒲公英植株7株,转化率为17.07%。采用Real-time PCR方法检测转基因植株中杜仲Eu REF1基因的表达情况,目的基因在转基因植株中的表达量相对于野生型植株均被上调。采用碱煮法分别提取转基因植株及野生型植株的橡胶,结果显示转杜仲Eu REF1基因的蒲公英植株中橡胶含量高于野生型植株,7株转基因蒲公英橡胶的含量平均比野生型蒲公英橡胶的含量提高了5.03%综上所述,杜仲Eu REF1基因在橡胶合成的过程中起着关键作用,将其遗传转化至蒲公英中可以提高橡胶的含量。