前言 RNA干扰（RNA interference，RNAi）又称基因沉默是一种序列特异性的转录后基因沉默机制。它通过一段双链RNA（dsRNA）导致同源mRNA降解，从而使目的基因表达下调，是生物体内的一种进化保守机制。相关研究已证明21bp的小干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）能够在哺乳动物细胞内诱导RNAi效应。通过制备特定的siRNA，导入生物体内可以有目的地抑制靶基因的表达，因此RNAi可用于基因功能分析、治疗病毒感染、治疗肿瘤以及其它基因相关性疾病方面的研究。在白血病中，研究者使用针对BCR-ABL的siRNA可有效地抑制BCR-ABL在白血病细胞中的表达，并导致细胞凋亡。 Wilms’瘤基因（Wilms’ tumor gene，WT1）最初被认为是肿瘤抑制基因，但在人类白血病细胞中呈异常高表达，其表达水平与预后呈负相关。WT1基因的反义寡核苷酸可抑制白血病细胞增殖、诱导细胞凋亡。该基因在发育分化和白血病生成中起重要作用。 本研究采用WT1siRNA抑制WT1基因在K562细胞株中的表达，观察抑制K562细胞中WT1基因对肿瘤细胞增殖及凋亡的影响，从而探讨癌基因WT1在白血病中作为肿瘤基因治疗靶位以及WT1基因相关药物开发的可能性，为白血病的基因治疗提供新的思路。 材料与方法 订购化学合成3条WT1 siRNAs，同时将K562细胞置于10％小牛血清的RPMI-1640培养基中，于37℃、5％CO₂、饱和湿度条件下培养，每3d更换培养液、按1:3传代。取指数增长期细胞，在转染实验开始前12h更换新鲜无抗生素培养液。 实验分两步：