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目的：重组质粒pcDNA3．1-full length HIF-1α、pcDNA3．1-dominant negative HIF-1α、空质粒pcDNA3．1转染人宫颈癌SiHa细胞，观察各组SiHa细胞缺氧诱导因子-1α（Hypoxia inducible factor 1α，HIF-1α）、VEGF蛋白表达水平及细胞凋亡情况，以及不同CoCl2化学缺氧条件下SiHa细胞的生长情况的，以探讨HIF-1α在SiHa细胞的血管生成、缺氧保护、凋亡、增殖过程中的作用，为今后深入研究宫颈癌发病机制、开展基因治疗打下基础。方法：1．构建真核表达载体pcDNA3．1-full lengthHIF-1α，扩增重组质粒pcDNA3．1-dominant negative HIF-1α，并进行酶切、测序鉴定。2．脂质体转染法将重组质粒pcDNA3．1-dominant negative HIF-1α、pcDNA3．1-full length HIF-1α和空质粒pcDNA3．1转染入SiHa细胞，经抗生素G418筛选出稳定转染dominant negative HIF-1α和fulllength HIF-1α基因的细胞单克隆，分别命名为dn HIF-1α组、fL HIF-1α组、pcDNA3．1组。3．采用免疫细胞化学法和Western blot检测dn HIF-1α组、fL HIF-1α组、pcDNA3．1组与未转染组细胞中HIF-1α表达在蛋白水平的差异，并进一步观察其中VEGF表达的变化，以了解其与HIF-1α基因的关系。4．光学显微镜下观察细胞的形态变化。5．采用原位缺口末端标记（TUNEL）法检测200μmol╱L CoCl2处理48小时细胞凋亡情况。6．不同浓度CoCl2（0，50，100，150，200μmol／L）处理细胞，MTT法观察其生长增殖情况。结果：1．酶切和序列测定显示，重组质粒pcDNA3．1-dominant negative HIF-1α和pcDNA3．1-full length HIF-1α中的目的基因插入正确。2．免疫细胞化学结果显示，fL HIF-1α组、dn HIF-1α组、pcDNA3．1组和未转染组HIF-1α蛋白的积分光密度（IOD）值分别为：97728.298，3055.799，4295.064，4543.741，fL HIF-1α组与其他三组比，差异均有统计学意义（P＜0.05）；dn HIF-1α组与其他三组的差别无统计学意义（P＞0.05）。fL HIF-1α组、dn HIF-1α组、pcDNA3．1组和未转染组VEGF蛋白的IOD值分别为：12945.65，6581.310，6638.807，7183.682，fLHIF-1α组与其他三组比，dn HIF-1α组与其他三组相比，差异均有统计学意义（P＜0.05）。3．Western blot结果显示，fL HIF-1α组、dn HIF-1α组、pcDNA3．1组和未转染组VEGF的相对量分别为2.09，1.05，1.35，1.44，fL HIF-1α组与其他三组比，差异均有统计学意义（P＜0.05），dn HIF-1α组与其他三组相比，差异均有统计学意义（P＜0.05），未转染组、pcDNA3．1组间的差异无统计学意义（P＞0.05）。fL HIF-1α组、dn HIF-1α组、pcDNA3．1组和未转染组HIF-1α／Tubulin-β的灰度比分别为：1.29，0.72，0.77，0.79，fL HIF-1α组与其他三组比，差异均有统计学意义（P＜0.05）；dn HIF-1α组与其他三组的差别无统计学意义（P＞0.05）。4．光学显微镜下观察细胞的形态学改变，正常氧条件下培养的各组SiHa细胞生长良好。COCl2（200μmol／L）处理48小时后，各组细胞均发生凋亡，但dn HIF-1α组细胞凋亡最明显，细胞变小、皱缩，核固缩，细胞碎片、脱落、漂浮细胞增多。fL HIF-1α组仅有少量细胞发生凋亡较多细胞处于分裂期。5．TUNEL结果显示，fL HIF-1α组、dn HIF-1α组、pcDNA3.1组和未转染组细胞的凋亡率分别为：22.52％，66.86％，36.12％，38.0％，fLHIF-1α组与其他三组比，差异均有统计学意义（P＜0.05），dn HIF-1α组与其他三组相比，差异均有统计学意义（P＜0.05），未转染组、pcDNA3．1组间的差异无统计学意义（P＞0.05）。6．MTT结果显示，正常氧培养和CoCl2条件下，fL HIF-1α组细胞增殖能力均明显高于dn HIF-1α组、pcDNA3．1组、未转染组（P＜0.05）。dn HIF-1α组增殖能力低于其他3组（P＜0.05）。pcDNA3．1组与未转染组之间差异无统计学意义。结论：1．酶切和DNA测序证实pcDNA3．1-full length HIF-1α真核表达载体构建成功。2．full length HIF-1α能促进宫颈癌细胞增殖并阻止CoCl2化学缺氧引起的凋亡，dominant negative HIF-1α则相反，提示HIF-1α有促进增殖、抑制凋亡的作用。3．full length HIF-1α能上调VEGF蛋白的表达，dominant negative HIF-1α对HIF-1α蛋白的表达没有影响，却能降低VEGF蛋白的表达。提示重组质粒dominant negative HIF-1α可望在宫颈癌治疗中发挥作用。