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研究背景特发性肺纤维化（Idiopathic pulmonary fibrosis IPF)，其病变局限在肺脏，导致全肺弥漫性的纤维化，引起肺组织功能严重受损害及进行性加重的呼吸困难，最终导致呼吸循环衰竭。该病病因不明确，研究发现多种体液因素与细胞因素参与了肺纤维化的发生、发展过程，但具体机制尚未阐明。IPF最终导致进行性进展的肺组织功能损害及极度呼吸困难，且目前临床对该病尚缺乏有效的治疗手段，因此通常具有较高的病死率。IPF的发病群体主要为成人、且随着年龄增加而增高。但因反复发生的急性支气管炎、各种肿瘤疾病、误服农药等原因，使得该病在儿童这一低龄组的发病率逐年升高。IPF临床常规的治疗方法仅仅只能缓解病情，而达不到完全控制疾病进展并最终达到治愈。因此目前临床研究的热点及焦点集中在探寻肺纤维化的致病因素及其发病机制，寻找能够抑制炎症反应、阻止纤维化进程，从而进一步使得肺纤维化达到治愈的可能、且副作用低的有效方法。丹参酮ⅡA是从丹参根部提取的脂溶性物质，它的分子式为C18H12O3。其属于二萜醌类化合物，具有抑菌作用、抗炎作用、类激素样药理作用，临床多用于治疗各种感染性疾病、心血管神经系统疾病、皮肤疾病。目前尚不明确丹参酮对肺纤维化是否具有保护作用。人体内主要的体液调节系统：肾素-血管紧张素-醛固酮系统（Renin-aldosterone-aldosterone system，RAAS），在肺纤维化的发生发展过程中起着至关重要的作用。血管紧张素转化酶（Angiotensin converting enzyme，ACE）是RAAS系统的重要成员，可以水解血管紧张素Ⅰ（AngiotensinⅠ，AngⅠ）为血管紧张素Ⅱ（AngiotensinⅡ，AngⅡ），AngⅡ在各种炎症的发生、发展过程中发挥着重要的作用。血管紧张素转化酶2（Angiotensin converting enzyme2，ACE2）是RAAS系统的另一重要成员，它是ACE的同源物，但其作用与ACE又不同。ACE2可以使AngⅠ及AngⅡ水解而产生Ang（1-9）和Ang（1-7），从而使AngⅡ介导的炎症反应减轻。本实验拟观察丹参酮ⅡA对肺纤维化具有的保护作用，并进一步深入研究其可能的作用机制，为其在肺纤维化的临床应用提供理论依据。实验目的1．观察丹参酮Ⅱ A对博莱霉素导致的肺纤维化的保护作用。2．观察丹参酮Ⅱ A是否通过ACE-2/ANG-(1-7)轴来减轻博莱霉素导致的肺纤维化。实验方法为观察丹参酮Ⅱ A对博莱霉素导致大鼠肺纤维化的影响，将雄性SD大鼠随机分成对照组、博莱霉素组和博莱霉素+丹参酮IIA组共三组（n=10）。博莱霉素组经气管内滴注博莱霉素（5mg/kg,50μl）造成肺纤维化模型，博莱霉素+丹参酮IIA组在经气管内滴注博莱霉素后1小时腹腔注射给予丹参酮IIA (25mg/kg/day，共28天）。对照组气管注入0.9%无菌生理盐水（50μl）。肺系数分析：在第7天、14天、28天时间观察点，将大鼠麻醉后切开胸骨取出肺脏，将肺组织用滤纸清洁并计算出系数。肺组织学分析：将肺组织石蜡包埋后切成4μm厚的切片，然后分别进行苏木素和伊红染色(HE)、马苏及天狼星红染色，显微镜下观察肺实质及肺间质的改变。免疫组织化学染色分析ACE2、ANG-(1-7)和TGF-β的表达。Western-blot实验测定ACE-2, TGF-β蛋白表达。聚合酶链式反应（RT-PCR）分析ACE2与TGF-β的mRNA水平的表达。ELISA检测肺组织中ANG-(1-7)含量。实验结果气管滴入博莱霉素导致大鼠体重明显下降，并大大增加了肺组织系数。经丹参酮IIA治疗后明显遏制了大鼠体重的进行性减轻，同时显著降低了大鼠肺组织的系数。大鼠肺组织病理学结果：HE染色显示博莱霉素干预后，随着时间的延长，肺泡损伤、各种炎细胞浸润、肺间质增生，而丹参酮IIA扭转了博莱霉素导致的大鼠肺损伤的这些改变。马苏染色显示博莱霉素导致逐渐加重的肺泡破坏、肺间质增厚、成纤维细胞扩散，而丹参酮IIA可以减轻这些改变。天狼星红染色显示博莱霉素组随着时间的延长，越来越多的III型胶原纤维集聚在大鼠肺组织，而丹参酮IIA明显减轻了这些改变。免疫组织化学染色显示在28天终点，博莱霉素导致大鼠肺组织中ACE-2的表达显著减少。丹参酮IIA逆转了大鼠肺组织ACE-2的表达。通过WB实验进一步检测ACE-2的蛋白质水平：博莱霉素组ACE-2蛋白水平明显减少，而丹参酮IIA提升了ACE-2的表达。PCR实验结果显示：ACE-2的mRNA水平在博莱霉素组明显减少，丹参酮IIA可增加大鼠肺组织ACE-2的mRNA的表达。丹参酮IIA增加了博莱霉素导致大鼠肺组织ANG-(1-7)的蛋白表达。丹参酮IIA减少了博莱霉素导致的大鼠肺组织中TGF-β1的表达。实验结论1．丹参酮ⅡA减轻了博莱霉素所导致的肺损伤、炎症和肺纤维化。2．丹参酮IIA上调了博莱霉素干预大鼠肺组织ACE-2、ANG-(1-7)的蛋白表达。