【摘 要】
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猪圆环病毒2型（Porcine circovirus type 2,PCV2）在猪群中广泛感染,可引起猪的繁殖障碍,给养猪业造成严重的经济损失。研究表明,母猪黄体中存在PCV2病原,但其对黄体组织的影响及机制尚不明确。本研究首先检测了屠宰场卵巢黄体组织中PCV2的感染情况,并通过组织形态学观察其病理变化;进一步通过分离原代黄体细胞,研究PCV2对细胞增殖、凋亡、激素分泌的影响及相关信号分子的变化情
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猪圆环病毒2型（Porcine circovirus type 2,PCV2）在猪群中广泛感染,可引起猪的繁殖障碍,给养猪业造成严重的经济损失。研究表明,母猪黄体中存在PCV2病原,但其对黄体组织的影响及机制尚不明确。本研究首先检测了屠宰场卵巢黄体组织中PCV2的感染情况,并通过组织形态学观察其病理变化;进一步通过分离原代黄体细胞,研究PCV2对细胞增殖、凋亡、激素分泌的影响及相关信号分子的变化情况,初步探明PCV2对黄体的损伤及其作用机制。本研究可为PCV2感染黄体引起的卵巢功能异常提供理论依据。主要结果如下:（1）PCV2在母猪黄体组织中广泛感染并引起组织损伤。采用PCR法对116份猪黄体组织进行了PCV2病原的检测,发现其感染率达88.8%（103/116）;免疫组织染色检测发现PCV2病原主要定位于黄体组织中的黄体细胞和巨噬细胞;组织病理学观察发现PCV2感染可引起黄体细胞的核固缩和胞质出现空泡化,并促进细胞发生凋亡。（2）PCV2引起猪黄体细胞相关功能的紊乱。本研究通过胶原酶消化法,可分离获得纯度较高的猪原代黄体细胞;PCV2可体外感染黄体细胞,荧光定量PCR法检测发现随着培养时间延长细胞中的病毒拷贝数显著增加。CCK8法检测发现1 000 TCID50的PCV2感染黄体细胞48 h时,可显著抑制黄体细胞的增殖（P＜0.01）。流式细胞术和TUNEL检测发现,PCV2感染黄体细胞可显著促进黄体细胞的凋亡（P＜0.05）;采用RT-q PCR对PCV2感染后细胞中凋亡相关基因进行检测,发现100 TCID50病毒感染可显著上调Caspase-3基因的表达（P＜0.01）,但对Bax和Bcl-2的表达作用不显著,1 000 TCID50感染时,Bax基因的表达显著上调（P＜0.01）,而Bcl-2和Caspase-3基因表达与对照比差异不显著;p38特异性抑制剂处理黄体细胞后,发现其能抑制PCV2感染所导致的促凋亡基因Bax和Caspase-3的升高,同时显著抑制PCV2感染所导致的抗凋亡基因Bcl-2的下降;Western blotting检测发现,病毒感染后黄体细胞中Bax、Caspase-3、Caspase-9和p-p38/p38的水平显著升高（P＜0.05）;p38抑制剂处理后可显著抑制PCV2感染所导致的Bax和Caspase-3的升高。表明100 TCID50的病毒感染就能促进黄体细胞凋亡,p38 MAPK信号通路参与病毒诱导的黄体细胞凋亡途径。此外,1 000 TCID50的PCV2感染可显著抑制黄体细胞中孕酮的分泌,且显著抑制细胞激素相关合成酶基因St AR、3β-HSD和CYP11A1 m RNA的表达。本研究表明,PCV2在猪黄体组织中存在广泛感染,并引起组织损伤,这种损伤可能是细胞凋亡引起的;PCV2可在黄体细胞中复制,抑制细胞增殖和孕酮的分泌并促进黄体细胞的凋亡。
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