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目的:本课题旨在通过全反式维甲酸(All-Trans Retinoic Acid,ATRA)对人髓系白血病细胞株K562细胞的干预来分析同源盒基因(Homeobox genes,HOX)A5的表达变化及其与凋亡率、细胞周期的关系,探讨HOXA5在髓系白血病发生、发展过程中的作用。为临床治疗白血病提供实验依据。方法:1.采用肿瘤细胞体外培养技术培养人髓系白血病细胞K562细胞作为实验模型。2.细胞增殖-毒性实验(Cell Counting Kit-8,CCK-8):测定用不同浓度的ATRA干预K562细胞24h、48h、72h、96h后,对K562细胞的增殖抑制情况,以确定ATRA干预K562细胞的最佳浓度值。3.实验分组:取对数生长期细胞(约105/ml),将K562细胞随机分为ATRA干预组(实验组)和对照组。实验组设立三个时间亚组,以10.0 umol/L的ATRA分别干预24h、48h和72h;对照组用培养基代替ATRA,其余同ATRA干预组。4.流式细胞术检测:测定10.0 umol/L ATRA分别干预K562细胞24h、48h、72h后,各组细胞的凋亡情况。5.流式细胞分析仪检测:检测并分析10.0 umol/L ATRA干预K562细胞不同时间后,与相应的对照组相比细胞周期分布的变化。6.实时荧光定量pcr(rt-pcr)技术检测:测定10.0umol/latra干预k562细胞24h、48h、72h后,细胞中hoxa5mrna的表达情况,并分析hoxa5mrna的表达与细胞周期、凋亡的关系。7.蛋白免疫印迹(westernblot)法检测:测定10.0umol/latra干预k562细胞24h、48h、72h后细胞中hoxa5蛋白的表达情况,并分析hoxa5蛋白表达与细胞周期、凋亡的关系。8.统计方法分析:将实验结果通过统计学spss17.0软件处理,以p<0.05为差异有统计学意义。两变量间相关性分析采用spearman等级相关分析检验,a=0.05为显著性检验水准。结果:1.cck-8结果显示:atra可以抑制k562细胞的增殖,各实验组与对照组相比,od值的差异有统计学意义(p<0.05)。atra干预浓度为7.5umol/l、10.0umol/l时,各组细胞在不同时间点的生长趋势最佳。本实验最终选取10.0umol/l作为干预药物浓度。2.流式细胞术检测细胞凋亡率结果显示:实验组细胞凋亡率明显高于对照组(p<0.05),且各实验组随着药物干预时间的延长,细胞凋亡率也逐渐增加(p<0.05)。3.流式细胞术检测细胞周期分布显示:atra干预k562细胞24h、48h、72h后,g0/g1期比例增高,s期比例降低,细胞增殖周期被阻抑在g0/g1期,细胞增殖受到抑制。4.rt-pcr结果显示:k562细胞中可以检测到hoxa5mrna的表达,实验组hoxa5mrna的表达量较对照组升高(p<0.05),且随着干预时间延长各实验组间HOXA5 mRNA的表达量也逐渐增加(P<0.05)。5.Western Blot结果显示:HOXA5蛋白高表达于K562细胞中,ATRA干预组表达量较正常对照组高(P<0.05),且随着干预时间的延长HOXA5蛋白的表达量逐渐升高(P<0.05)。6.HOXA5的表达水平与细胞凋亡相关性显示:K562细胞中HOXA5 mRNA及蛋白的表达量与细胞凋亡率的相关性经Spearman等级相关分析显示两者呈正相关。7.HOXA5的表达水平与细胞周期相关性显示:HOXA5 mRNA及蛋白的表达量与细胞周期G0/G1期增加百分比呈正相关,与S期降低百分比呈负相关。结论:1.ATRA干预K562细胞后,细胞中HOXA5 mRNA及蛋白的表达量升高。2.ATRA可能通过上调HOXA5 mRNA及蛋白的表达抑制K562细胞增殖,促进细胞凋亡。