胰岛素样生长因子(insulin-like growth factors，IGFs)是体内重要的生长因子，其由两种相关多肽组成：IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ。大量研究表明，它们对组织细胞的增殖、分化、凋亡，机体的生长发育及肿瘤的发生发展起重要的调节作用。 为了获得大量纯度高的、具有生物学活性的人IGFs以满足基础研究与临床应用的需要，本文将hIGFs基因与pET系列原核表达载体进行了重组，在大肠杆菌BL21中初步进行了表达方面的实验研究。 1．以人胎盘组织为实验材料，采用RT-PCR方法，获得了包含CDS的hIGF-Ⅰ和hIGF-Ⅱ基因片段，分别连入克隆载体pMD18-T中，测序结果分析表明扩增的片段均为目的基因。 2．各另外设计一对特异性PCR引物，导入适当限制性内切酶切点，以上述连有目的基因的克隆载体为模板，采用PCR方法扩增基因片段，获得长度约230bp的IGF-Ⅰ和219bp的IGF-Ⅱ成熟肽基因序列。 3．将hIGF-Ⅰ与hIGF-Ⅱ成熟肽基因进行双酶切后，分别连入原核表达载体pET-32a(+)和pET-30a(+)中，构建原核表达重组质粒pET-32a(+)-IGF-Ⅰ和pET-30a(+)-IGF-Ⅱ。测序验证表达载体构建正确后，以BL21(DE3)作为宿主菌，进行融合表达研究。 4．SDS-PAGE分析表明，重组质粒pET-32a(+)-IGF-Ⅰ在IPTG诱导下表达分子量约30kDa的融合蛋白，但其表达量不高，约为菌体总蛋白的10％左右；重组质粒pET-30a(+)-IGF-Ⅱ在IPTG诱导下表达分子量约14 kDa的重组蛋白，融合蛋白表达量约占菌体蛋白总量的35％。 5．菌体采用溶菌酶裂解，融合蛋白以包涵体形式存在；对hIGF-Ⅰ融合蛋白进行了western blot分析，确认所表达蛋白为目的蛋白。