【摘 要】
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目的:初步探讨LPS干预M1型巨噬细胞产生炎症因子的表达调控以及对Eca109细胞的调节作用。方法:（1）利用PMA联合LPS和IFN-γ诱导THP-1细胞极化为M1型巨噬细胞,通过RT-q PCR和Western-Blot检测TNF-α和IL-1β的m RNA以及蛋白表达变化;（2）LPS干预M1型巨噬细胞,Western-Blot检测TNF-α等相关炎性因子的表达变化;Transwell迁移实
【基金项目】
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《Survivin通过IKKβ调控食管鳞癌细胞自噬晚期过程的分析机制的研究》（国家自然科学基金;项目编号:81660459）; 广东省粤北人民医院高水平医院建设基金
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目的:初步探讨LPS干预M1型巨噬细胞产生炎症因子的表达调控以及对Eca109细胞的调节作用。方法:（1）利用PMA联合LPS和IFN-γ诱导THP-1细胞极化为M1型巨噬细胞,通过RT-q PCR和Western-Blot检测TNF-α和IL-1β的m RNA以及蛋白表达变化;（2）LPS干预M1型巨噬细胞,Western-Blot检测TNF-α等相关炎性因子的表达变化;Transwell迁移实验检测LPS干预后对M1型巨噬细胞的运动能力的影响;加入JAK/STAT通路抑制剂AG490后,检测TNF-α等炎症因子以及p-STAT3的蛋白表达;（3）建立M1型巨噬细胞与Eca109细胞共培养模型,流式细胞术检测共培养24h M1型巨噬细胞对Eca109细胞的凋亡与周期的影响;细胞划痕、Transwell实验检测M1型巨噬细胞对Eca109细胞迁移能力的影响;CCK-8检测M1型巨噬细胞对Eca109细胞增殖的影响。结果:（1）PMA刺激THP-1细胞24h,细胞全部发生贴壁现象,少数细胞有伪足出现,继而加入LPS联合IFN-γ,细胞由圆形变为长梭形,RT-q PCR和Western-Blot检测TNF-α和IL-1β的m RNA（TNF-αP＜0.01,IL-1βP＜0.001）和蛋白表达均升高（TNF-αP＜0.0001,IL-1βP＜0.0001）;（2）LPS干预M1型巨噬细胞3h,TNF-α等炎症因子蛋白表达均增高（TNF-αP＜0.05,IL-1βP＜0.01,IL-8 P＜0.05）,在LPS持续干预后炎性因子表达趋势并不相同。LPS干预M1型巨噬细胞后,p-STAT3蛋白表达水平增高（P＜0.05）,加入抑制剂AG490后,p-STAT3蛋白表达受到抑制作用（P＜0.05）,同时TNF-α等相关炎症因子也受到抑制作用（TNF-αP＜0.01、IL-1βP＜0.001）。（3）Eca109细胞与M1型巨噬细胞共培养24h,M1型巨噬细胞表达TNF-α等相关炎症因子均增高（P＜0.05）。与M1型巨噬细胞共培养24h的Eca109细胞总凋亡率较对照组增高（P＜0.01）;CCK-8实验显示与M1型巨噬细胞共培养24h的Eca109细胞较对照组OD值降低（P＜0.01）;细胞划痕实验显示与M1型巨噬细胞共培养24h迁移率较对照组降低（P＜0.01）;Transwell结果显示,共培养24h时的细胞穿孔数目明显比对照组少（P＜0.001）;流式检测周期显示,与M1型巨噬细胞共培养24h后的Eca109细胞S期明显缩短（P＜0.01）。结论:LPS干预M1型巨噬细胞TNF-α等炎症因子表达增高,且这些炎症因子的表达是通过激活JAK/STAT通路介导的;LPS干预M1型巨噬细胞与Eca109细胞共培养模型,其TNF-α与IL-1β的蛋白表达在24h后明显降低,与LPS仅干预M1型巨噬细胞炎症因子表达不同;M1型巨噬细胞能促进Eca109的凋亡,抑制其增殖与迁移作用。
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