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乳腺癌特异性标志物的发现有助于乳腺癌的临床诊断和转移、微转移的监测。人乳腺珠蛋白(human mammaglobin,hMAM)是一种只在乳腺组织表达,在原发性乳腺癌及乳腺癌细胞系中表达显著增加的蛋白,其cDNA编码大约10 kD的分泌性糖蛋白,在乳腺组织中与人亲脂素B (lipophilin B,又称BU101)以头尾连接形成共价复合物。hMAM乳腺组织特异性和分泌性蛋白的特点,使其在乳腺癌临床诊断上具有潜在的应用价值;其肿瘤相关抗原的特性,使其可作为肿瘤疫苗设计的靶点应用于肿瘤免疫治疗。由于对hMAM作为乳腺癌肿瘤标志物和相关抗原的认识存在一定差异,而许多研究表明乳腺癌细胞MCF-7内存在多种不同分子的异构体,本研究拟利用反转录和二次PCR的方法探讨报道为hMAM阴性的MCF-7中是否存在hMAM异构体,再对其从生物信息学和基因表达等方面进行研究,探讨其在乳腺癌临床诊断和乳腺癌疫苗设计中的价值和意义。研究目的:探讨hMAM是否存在分子结构有差异的异构体;生物信息学分析该hMAM异构体产生的原因和可能的功能改变,为进一步深入研究奠定基础;Real-time PCR分析野生型和异构体hMAM在乳腺癌细胞系和乳腺癌患者外周血脱落细胞中的表达情况,探讨该异构体可否作为乳腺癌标志物——hMAM的补充。主要的内容和结果:1. hMAM异构体的基因克隆根据GenBank中编码hMAM cDNA序列设计特异引物,利用反转录和二次PCR方法从被认为是hMAM阴性的乳腺癌细胞系MCF-7中扩增出一个270 bp的DNA片段。经多次独立重复实验证明此基因序列同GenBank中hMAM cDNA序列(279 bp)相比,有9个连续碱基(236~244,GTGTTTATG)缺失,是一种hMAM的异构分子。氨基酸序列比对发现,此异构体基因的编码产物与hMAM野生型的编码产物有3个连续氨基酸[79~81,缬氨酸(V)、苯丙氨酸(F)、蛋氨酸(M)]的缺失。2. hMAM异构体的生物信息学分析(1) DNA序列分析显示该异构体hMAM同野生型hMAM一样位于人11号染色体(q12.3),其缺失的9个核苷酸位于第二内含子的RNA剪接位点的5’-端剪接供体处,