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日本血吸虫病是一种由于感染日本血吸虫而引起的寄生虫病,流行于中国、日本、菲律宾、印度尼西亚等亚洲国家,严重地危害着人类健康。钉螺是日本血吸虫的唯一中间宿主,因此,消灭钉螺是控制血吸虫病传播的重要方法之一。
目前普遍使用的化学合成杀螺剂为氯硝柳胺,该药杀螺效果好,对人、畜毒性低,但是对鱼类的毒力较强。而植物灭螺药物由于有着低毒,易生物降解等优越特性而日益受到关注。
本文通过灭螺植物筛选,找到灭螺效果较好的苦楝叶,并按照活性跟踪的方法,得到了苦楝叶灭螺有效部位,并以此进行了活性物质的分离、对非靶生物及日本血吸虫尾蚴毒性、对钉螺软体组织糖原蛋白含量影响的研究。为了扩大苦楝植物资源的利用并从生态灭螺的角度研究苦楝对钉螺的生防作用,对苦楝根及根周土进行了灭螺作用的初步研究。主要研究内容如下:
(1)通过对比不同待筛植物鲜叶、干叶水匀浆及不同的灭螺药物剂量和不同浸泡时间的灭螺效果,从中筛选出灭螺活性较好的苦楝叶。并且苦楝干叶水匀浆的效果好于鲜叶水匀浆的效果。48 h苦楝干叶水匀浆中、高剂量的杀螺率都可以达到90%及以上,且苦楝干叶醇浸膏在72 h的杀螺率都为100%好于苦楝干叶水匀浆的杀螺效果。
(2)将上述苦楝叶乙醇浸膏采用系统分离法分别得到石油醚提取物,乙醚提取物,乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物及萃余物。苦楝不同极性部位杀螺效果表明,石油醚萃取物与其它部位相比,具有最高的杀螺活性,其72 h时的LC50为101.6mg/L。石油醚提取物对斑马鱼72 h的LC50为285.6 mg/L,大于其对钉螺的LC50,说明苦楝叶对鱼的毒性较小。对日本血吸虫尾蚴的杀灭作用很小。
(3)对苦楝叶石油醚提取物进行了硅胶柱层析,通过活性部位跟踪,筛选出有效的杀螺流份C与G,进行了GC分析,并通过GC-MS对其中所含物质进行了分析。
(4)研究了苦楝叶石油醚提取物对钉螺软体组织中糖原和总蛋白含量的影响。研究发现其对钉螺软体组织重量的影响不大,用蒽酮显色法测定处理后钉螺软体的糖原含量变化明显,处理72 h后低浓度苦楝叶石油醚提取物使钉螺软体组织的糖原含量上升48.42%;高浓度苦楝叶石油醚提取物使钉螺软体组织的糖原含量下降75.61%,明显的降低了钉螺软体组织的糖原含量。用考马斯亮蓝法测定其蛋白质含量,结果显示蛋白含量没有明显变化。
(5)为了扩大苦楝植物资源的利用,研究了苦楝根水煎液对钉螺的杀灭作用,在1 g(鲜根重量)/100 mL旅度下,24 h的杀螺率得到100%,并对苦楝根水煎液进行了活性部位分离,氯仿提取物对钉螺具有较强的杀灭作用,72 h杀螺率达到100%。对氯仿提取物进行了酸性氧化铝柱层析,得到了一种白色针晶,经碳谱、氢谱鉴定,确认为β-谷甾醇,做了杀灭钉螺的活性测定显示,对钉螺没有杀灭作用。
从生态灭螺的角度,对苦楝根皮及苦楝根周土杀灭钉螺的作用进行了研究。在第3天不同浓度苦楝根皮的水匀浆液的杀螺率都达到了100%。苦楝根周土的水匀浆液最高剂量5天的杀螺率平均可达到85.5%,显示了一定的杀螺效果。为生态灭螺提供研究数据。