葡萄茎叶黄酮对秀丽线虫氧化损伤的防护研究

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葡萄生长过程中,会产生大量的废弃茎叶,北冰红、白鸡心、蜜汁三个品种的葡萄在我国东北地区具有抗寒、抗霜霉病、产量高的明显种植优势。为合理利用废弃物资源,本课题以北冰红、白鸡心、蜜汁三种葡萄的废弃茎叶资源为原料,提取其中的黄酮类化合物,进行体外抗氧化能力和体内抗氧化能力评价,为葡萄茎叶废弃资源的回收和再利用提供理论基础。本实验采用超声辅助的有机溶剂提取法进行葡萄茎叶黄酮的提取,采用大孔树脂柱层析的方法进行粗提物纯化,总黄酮提取率为北冰红叶31.34%、北冰红茎10.68%、白鸡心叶14.13%、白鸡心茎13.52%、蜜汁叶20.64%、蜜汁茎11.47%。在测定三种葡萄茎叶黄酮提取物中的有效成分含量后选择北冰红叶组进行成分分析,采用液相色谱-质谱法检测北冰红叶黄酮的主要成分,结果表明,北冰红叶黄酮提取物中包含的黄酮种类有:白藜芦醇、柚皮素、山奈酚、槲皮素、杨梅素、川陈皮素。通过DPPH、ABTS和羟自由基清除实验测定了北冰红叶黄酮的体外抗氧化能力,结果表明,北冰红叶黄酮具有清除这三类自由基的能力,其清除效率在实验设置范围内随着浓度升高而升高,其原因可能是分子结构中的羟基数量不同。同时与其他植物源黄酮提取物相比,北冰红叶黄酮的相对抗氧化能力更高。以秀丽隐杆线虫为动物模型,进行了北冰红叶黄酮的体内抗氧化能力实验,分别测定了北冰红叶黄酮对线虫脂代谢和寿命延长作用的影响,结果表明,给药组线虫体内脂质和甘油三酯含量有显著性下降,其中,低剂量给药组线虫体内的脂质含量下降了14.96%,甘油三酯含量下降了12.75%,中剂量给药组线虫体内的脂质含量下降了63.78%,甘油三酯含量下降了19.24%,高剂量给药组线虫体内的脂质含量下降了57.48%,甘油三酯含量下降了16.80%。采用实时荧光定量PCR法测定脂代谢相关基因发现,其表达水平变化与脂肪含量下降相符。给药组线虫的常规寿命测定结果表明,北冰红叶黄酮有延长线虫常规寿命的功能,且在热应激和氧化应激状态下延寿作用依然生效,线虫与寿命相关基因的表达水平变化与延长寿命的现象相符。
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