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狭叶香蒲(Typha angustifolia)是一种营养丰富的可食用蔬菜,在我国已有3000多年的种植历史。中医认为,狭叶香蒲的可食用部分有清热解毒、利水消肿的功效,然而关于狭叶香蒲可食用部分的研究大多集中在原材料的粗加工阶段,狭叶香蒲多糖的提取纯化、一级结构解析及其功能活性的研究还鲜有报道。本研究以狭叶香蒲为研究对象,提取得到了香蒲粗多糖,完成了狭叶香蒲多糖的分离纯化、一级结构初步解析、体外抗氧化活性测定及抗炎活性测定等方面的研究。本研究将为狭叶香蒲多糖的开发利用提供科学依据。1.狭叶香蒲多糖的提取分离本研究从狭叶香蒲中提取得到粗多糖,进行了粗多糖的脱蛋白脱色工艺优化,开发出一种脱蛋白脱色的新方法——螯合树脂法。通过单因素实验筛选出螯合树脂法的最佳工艺参数,并在最佳条件下将其与经典的Sevag法进行比较,结果表明:螯合树脂法的脱蛋白率Dr%为69.2%、脱色率Cr%为55.6%、多糖保留率Rr%为87.5%,综合吸附效应指数ξ为70.6%,均显著高于Sevag法,且螯合树脂法不消耗任何有机试剂。同时,该方法与Sevag法相比,脱蛋白脱色前后在多糖的单糖组成、特征基团及分子量降解等方面没有显著差异,螯合树脂法不会破坏多糖的结构,可能会成为一种有前景的脱蛋白脱色方法。2.狭叶香蒲多糖的分级纯化、理化性质测定及一级结构解析本研究采用DEAE-52纤维素柱层析法对香蒲粗多糖进行了分级纯化,得到了2种纯化多糖,即中性多糖PTA-1和酸性多糖PTA-2。对纯化多糖PTA-1和PTA-2进行了总糖含量、蛋白质含量、糖醛酸含量的测定,结果表明:PTA-1蛋白质含量为3.66%,总糖含量为94.85%,不含糖醛酸;PTA-2未检出残留蛋白质,总糖含量为94.37%,糖醛酸含量为4.32%。初步分析得到了纯化多糖PTA-1和PTA-2的一级结构:PTA-1的分子量为87619 Da,为α-呋喃葡萄糖残基组成的葡聚糖,主链由(1→3)糖苷键构成;PTA-2的分子量为80853Da,由β-呋喃葡萄糖(66.7%)和呋喃鼠李糖(33.3%)组成,主链由(1→3)糖苷键构成。3.狭叶香蒲多糖的功能活性初步研究本研究评价了狭叶香蒲多糖的体外抗氧化活性和抗炎活性。测定了粗多糖及纯化多糖(PTA-1和PTA-2)的羟自由基清除能力和金属离子螯合能力。结果表明,粗多糖、PTA-1和PTA-2的羟自由基清除能力与浓度呈良好的量效关系,PTA-2的羟自由基清除能力较强;PTA-1和PTA-2均表现出较强的金属离子螯合能力,二者差异不显著。纯化多糖PTA-2表现出较强的体外抗氧化活性,因此本研究测定了纯化多糖PTA-2的抗炎活性。实验结果表明,50、100和200μg/m L的PTA-2干预对RAW264.7细胞活力无显著影响;200μg/m L的PTA-2的干预能显著降低IL-6的表达水平,100和200μg/m L的PTA-2的干预能显著使TNF-α呈剂量依赖性的降低;PTA-2(50、100和200μg/m L)的干预能以剂量依赖性的方式抑制NF-κB的激活;100和200μg/m L的PTA-2干预显著抑制了ROS的表达。本研究证明了纯化多糖PTA-2具有显著的抗炎活性。