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目的:1.分析非综合征型耳聋患者(nonsyndromic hearing loss, NSHL)及健康体检者中3种线粒体DNA(mitochondrial DNA, mtDNA)突变的发生频率、性质及临床资料特点,探讨线粒体DNA突变与非综合征型耳聋的关系。2.对mtDNA A1555G突变进行定量研究,探讨mtDNA A1555G突变的拷贝数与临床表型之间的关系,进一步阐明非综合征型耳聋临床表型多样性的分子遗传学基础。方法:1.应用PCR-限制性酶切和测序对486例散发NSHL患者mtDNA A1555G、mtDNA A3243G、mtDNA A7445G三个位点的突变进行检测。收集七个mtDNA A1555G突变的耳聋家系。2.建立RT-ARMS-qPCR系统对含突变型和野生型mtDNA 1555位点的片段的拷贝数进行定量检测。3.结合散发组和家系组耳聋患者的临床资料,统计分析mtDNA A1555G突变的拷贝数与临床表型多样性的关系。结果:1.486例NSHL患者mtDNA A1555G突变阳性率为9.05%(44/486),44例mtDNA A1555G突变中32例为同质性突变,12例为异质性突变;检出1例mtDNA G7444A突变;所有样本均未检出mtDNA A3243G、mtDNA A7445G突变;100例健康体检者中上述三个位点均未检出突变。2.共调查七个家系中的113人,男46人,女67人,年龄3个月至82岁,耳聋患者28人。其中母系成员57人,耳聋患者26人,临床症状从正常到极重度聋,因部分家系成员外出未能采集到血样,有完整资料71人(母系成员52人,耳聋患者26人)。mtDNA A1555G突变52人,其中同质性突变45人,异质性突变7人。氨基糖甙抗生素是这些家系致聋的重要原因。3.RT-ARMS-qPCR技术对含mtDNA点突变的DNA片段的定量检测结果稳定、准确。4.散发组mtDNA A1555G同质性突变的拷贝数与耳聋轻重程度无关(R=0.001,P=0.997);散发组mtDNA A1555G异质性突变的拷贝数与耳聋轻重程度相关(R=0.771,P=0.003),突变型的比例越高,耳聋程度越严重;家系组mtDNA A1555G同质性突变的拷贝数与耳聋轻重程度相关(R=0.341,P=0.022),突变型mtDNA A1555G拷贝数越高,耳聋程度越重;家系组mtDNA A1555G异质性突变的拷贝数与耳聋轻重程度相关(R=0.85,P=0.015),突变的比例越高,耳聋程度越严重。结论:1.首次实验证实mtDNA A1555G的突变形式有同质性和异质性两种;mtDNA A1555G是导致NSHL最常见的突变形式,与氨基糖甙抗生素致聋密切相关。mtDNA A3423G、mtDNA A7445G在NSHL中突变率低。新发现了一个mtDNA G7444A突变的NSHL家系。2.RT-ARMS-qPCR技术对定量检测含mtDNA A1555G点突变的DNA片段,结果稳定、准确。3.mtDNA A1555G拷贝数与耳聋的临床表型密切相关。对有相同遗传背景的同质性突变耳聋患者,其突变型mtDNA A1555G拷贝数越高,其耳聋程度越严重;对异质性突变的耳聋患者,其突变型mtDNA A1555G的拷贝数比例越高(突变异质性越高),其耳聋程度越严重。这个结果为解释耳聋临床表型多样性的分子遗传学基础指明了新的方向。