白条党参多糖提取工艺优化及抗牛病毒性腹泻病毒机制研究

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党参(Codonopsis palisula)作为甘肃省的道地药材,是主要的中药制剂配伍药材之一。众多研究表明,中药多糖具有良好的药理活性。本文以白条党参为研究对象,采用单因素和响应面试验优化白条党参多糖的提取工艺,在此基础上,以Fick第二定律为基础,研究了热水提取白条党参粗多糖的动力学和热力学行为。并对粗多糖的纯化、理化性质、结构和抗氧化特性进行研究。最后重点对粗多糖的抗病毒机制进行了研究。主要研究结果如下:(1)响应面法优化水提白条党参粗多糖最佳工艺条件为:料液比为1:26 g/m L,提取温度为348.15 K,提取时间为2.6 h,在此条件下多糖得率为9.719%。经验证,响应面优化结果与实际提取得率相符。粗多糖蛋白含量为0.36%,硫酸根含量为13.89%,糖醛酸含量为0.35%。采用DEAE-52纤维素柱和Sephadex G-100凝胶柱层析对党参粗多糖进行分离纯化,得到水洗中性多糖组分1个。白条党参粗多糖的流变学特性研究表明,随着多糖浓度升高,其黏度增大,且随剪切力增大溶液黏度减小;随着多糖溶液温度升高,黏度减小;随着多糖溶液p H的增大,溶液黏度先增大后减小;在不同盐溶液中,随着盐溶液的分子量增大,溶液黏度也增大。红外光谱检测结果显示,粗多糖为β型吡喃糖。在扫描电镜下粗多糖呈现多孔隙海绵状。热重量分析表明,当对多糖加热从30℃升高至800℃的过程中,存在两个阶段的失水,并且整个过程伴有三次放热反应,焓变分别为10.4 J/g,68.51 J/g和15.297 J/g。(2)水提白条党参粗多糖过程符合Fick第二定律,经动力学模型计算得出热水提取白条党参粗多糖的过程中活化能随料液比的增加先增大后减小,半衰期随温度的升高而减小,有效扩散系数随温度的升高而增大;热力学计算结果表明,ΔGm>0,熵变ΔSm<0,焓变ΔHm>0,表明提取过程是一个逆反应自发进行的过程,温度升高使得提取过程混乱程度增加,伴随吸热反应。(3)白条党参粗多糖的体外抗氧化结果显示:随着多糖浓度的增大,其清除DPPH自由基的能力也逐渐增大,EC50为0.6 mg/m L;随着多糖浓度的增大,脂质过氧化物的清除能力在其增大到0.4 mg/m L达到较大能力后逐渐减小,EC50为0.2 mg/m L;H2O2清除能力随着浓度的增大逐渐增大,清除率最高可达70%,EC50为0.52 mg/m L。(4)研究了利巴韦林、白条党参粗多糖以及党参多糖标准品三种药物不同加药方式对BVDV病毒的抗病毒作用,测定了BVDV中core,Npro的m RNA与蛋白的相对表达量。以及BVDV病毒宿主MDBK细胞中炎症调节细胞因子(IL-8,TNF-α和IFN-α)的m RNA与蛋白的相对表达量。结果表明,白条党参粗多糖对BVDV病毒有良好的预防效果。
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