雄激素和孕激素对食蚊鱼形态雄性化和目标基因的影响

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本文研究雄激素物质雄烯二酮(androstenedione,AED)及其衍生物雄二烯二酮(androstadienedione,ADD)和孕酮(progesterone,PRO)对雌性食蚊鱼(Gambusia affinis)有害毒性影响。将性未成熟的雌性食蚊鱼进行室内染毒实验,分别暴露在不同静水浓度(0.5nM,5nM,50nM和500nM)的AED、ADD和PRO持续21天。采用卵黄蛋白原基因(VTGα)和臀鳍雄激素受体基因(ARα)的mRNA表达水平和椎肋骨及臀鳍条的形态雄性化变化作为评价雄激素效应的生物标记。结果显示,暴露于较高浓度AED(50nM和500nM)实验组和ADD(5nM、50nM和500nM)后,与二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)对照组相比,食蚊鱼卵黄蛋白原基因(FTGα)的mRNA表达水平极显著下降(p<0.01)。但,暴露于PRO(5nM、50nM和500nM)实验组后,食蚊鱼卵黄蛋白原基因(VTGα)的mRNA表达水平出现极显著上调(p<0.01),并呈剂量依赖性。分别持续暴露于AED(5nM、50nM和500nM)、ADD(50nM和500nM)和PRO(500nM)21天后,雌性食蚊鱼臀鳍的发育出现形态雄性化变化,第3臀鳍条的分节数随着暴露浓度的提高而成比例增加。结果显示,AED、ADD和PRO持续暴露使雌性食蚊鱼臀鳍发育具有雄性化变化特征,并伴随着其臀鳍雄激素受体(ARa)基因的mRNA瞬时表达上调。  对第14/15/16椎肋骨总长(14L/15L/16L)、第14/15/16椎肋骨末端与脊椎骨连接点的投影长度(14P/15P/16P)和第14/15/16椎肋骨尾部尖端到脊柱的高度(14D/15D/16D)所测量的数据的统计分析结果显示,暴露于AED和ADD不同浓度实验组的雌性食蚊鱼椎肋骨都有不同程度的明显的雄性化转变。本研究结果表明,P:D和L:D的比率变化相当明显地随着暴露浓度的增高而变化,其对环境内分泌干扰物的反应十分灵敏。结果还表明,暴露在任何PRO浓度中的食蚊鱼第14/15/16椎肋骨L、P、D和P:L之间比值不存在显著性差异(p>0.05)。而暴露在500nMPRO实验组其15P:D值明显高于对照组;组织切片观察显示,高浓度组(500nM)在暴露处理21天后卵巢发育开始出现不同程度的退化,多数卵母细胞发育停滞在Ⅱ~Ⅲ时相,细胞结构出现坏死现象,细胞核瓦解;卵巢内出现许多退化卵母细胞。本结果证明PRO具有明显的雄激素效应,不过,相关的作用机理机制仍不清楚。今后进一步的研究工作有必要去澄清其作用机制,并还应密切关注其对水生野生动物的生殖毒性影响。
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