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研究目的:2016年4月到2016年11月期间,西藏工布江达县和南木林县分别暴发了流行性角结膜炎(EKC)疫情,报道病例共达197例。首先确定2016年西藏两起流行性角膜炎疫情的病原体,并鉴定其型别:并分析两起疫情病原体(人腺病毒8型)的主要结构蛋白基因的特征及重组情况,为人腺病毒8型所致疾病的预防提供理论依据。研究方法:1.疫情分析:通过三间分布,对西藏两起EKC疫情进行流行病学分析。2.病原鉴定:采集2016年西藏两起流行性角膜炎疫情的眼结膜拭子共53份,其中第一起暴发41份标本,第二起暴发12份标本。采用Real-time PCR方法分别以人腺病毒通用引物及肠道病毒通用引物进行检测,确定疫情病原。3.腺病毒型别鉴定:腺病毒Real-time PCR阳性标本扩增六邻体(hexon)的loop2(HVR7)片段,通过测定Loop2片段序列,用BLAST方法和生物信息学方法对疫情病原的腺病毒进行初步的基因定型。4.病毒分离:腺病毒Real-time PCR鉴定为阳性的标本用HEp-2细胞进行病毒分离,盲传三代。5.基因特征分析:人腺病毒基因五邻体(penton)、六邻体(hexon)及纤突(fiber)基因之间易发生重组,且多为属内重组。选取分离成功的西藏EKC疫情毒株进行主要结构基因五邻体(penton)、六邻体(hexon)及纤突(fiber)基因进行全长测序。基于这三个主要蛋白,用西藏分离的4株腺病毒毒株和选自全世界的10株代表株及腺病毒D属30个型别代表毒株构建系统发育树,进行系统进化分析。研究结果:1.西藏两起EKC暴发病例中共有50份标本PCR检测结果是腺病毒阳性,通过扩增hexon基因Loop2片段并测序分析,BLAST分析结果和系统进化树分析结果都表明西藏的两起EKC暴发疫情初步鉴定为同一种病原HAdV-8导致的。2.针对分离成功12株毒株penton、hexon和fiber基因的的全长序列系统进化分析结果显示:此次疫情的病原为HAdV-8。分离成功的12株毒株的penton、hexon和fiber基因具有100%核苷酸同源性,这证实两次EKC疫情都是HAdV-8同一毒株导致的。西藏HAdV-8毒株与世界其他国家地区的HAdV-8代表株有很高的的核苷酸同源性,HAdV-8的penton、hexon和fiber基因序列是高度保守的。研究结论:1.此次流行性角结膜炎暴发疫情由人腺病毒8型引起,而且两次疫情的病原一致,是HAdV-8在西藏的持续流行。西藏两次EKC疫情暴发病例达197例,全是学生患病。2.HAdV-8自1955年首次分离鉴定后,全世界很多国家和地区均报告HAdV-8的暴发或散发流行,而在这之前我们大陆地区未见对该型病毒的正式报道。此次西藏自治区的两起EKC疫情是中国大陆范围内首次报道HAdV-8引起的EKC暴发,因此本研究结果将为我国腺病毒疫情防控提供重要的科学数据,并有利于EKC的预防和控制。3.我国腺病毒和EKC监测系统不完善,这也是疫情持续暴发的部分原因。目前急需建立完善的监测网络,以便应对突发的传染病。