[目 的]本研究在2020年7月-2021年6月期间,针对云南省曲靖、临沧两市环境中的污水开展肠道病毒监测,了解两地环境中肠道病毒的型别及分布,分析所监测到的肠道病毒的系统进化、分子流行病学特征,作为AFP病例监测体系的补充手段,进一步完善肠道病毒的监测体系,为防控肠道病毒疫情的流行和暴发提供科学依据。[方 法]1.标本采集:2020年7月-2021年6月期间,每月前往曲靖市、临沧市生活污水处理厂,在污水进水口各采集污水标本一份（约1200ml）,使用膜过滤法对肠道病毒进行浓缩富集。2.病毒分离:将污水浓缩液接种至RD、L20B细胞上进行肠道病毒的分离,盲传二代,扩增典型的肠道病毒病变分离株进行收获,并冻存于-20℃。3.VP1编码进行RT-PCR扩增,提取分离株RNA,使用RT-PCR对肠道病毒VP1区进行扩增;PCR产物通过琼脂糖凝胶电泳进行检测。4.基因测序和定型,将PCR 阳性产物送至测序公司进行序列测定,按照肠道病毒的分子定型方法进行型别的鉴定。5.统计学分析:采用SPSS17.0软件对流行病学数据进行统计分析,采用卡方检验（χ2）进行率或构成比的检验,P＜0.05认为差异存在统计学意义。[结 果]1.2020年7月-2021年6月,在云南省曲靖、临沧两市开展环境监测,共采集污水标本36份,其中曲靖市采集24份、临沧市采集12份,所有标本均分离到肠道病毒,两地肠道病毒阳性率均为100%（24/24,12/12）。共获得分离株185株,PV27株,阳性检出率为14.60%（27/185）;NPEV 158株,阳性检出率为85.40%（158/185）。曲靖市共分离到分离株99株,其中PV 26株,阳性检出率为22.23%（26/99）;NPEV 73株,阳性检出率为77.77%（73/99）。临沧市共分离到分离株86株,其中PV 1株,阳性检出率为1.17%（1/86）;NPEV 85株,阳性检出率为98.83%（85/86）。分离到的PV均为疫苗株或疫苗类似株。总样本中NPEV的年度阳性检出率高于PV年度阳性检出率。曲靖、临沧两地检出PV阳性率有统计学差异（χ2=7.570,P＜0.05）。2.观察时间内NPEV在时间分布上主要呈现出夏秋季节流行、冬春季节沉寂的流行模式。优势血清型E6在本研究期间检出较为频繁,流行高峰分布在2020年7月～2020年10月和2021年3月-2021年6月,流行区域主要集中在临沧。E30在2020年9月、11月和2021年1月、3月、6月分离到的分离株数量较多,2020年7月和2021年2月并未分离到分离株。观察时间内PV主要呈现出春夏流行趋势,集中在2020年12月和2021年2月、3月、4月和6月,流行区域主要集中在曲靖。检出PV-1型11株,阳性检出率为40.75%;PV-3型16株,阳性检出率为59.25%。环境污水标本中未检出PV-2型,主要以PV-1和PV-3型为主。3.本研究期间共检出10种不同型别的NPEV共158株,均为B组肠道病毒,未分离到A组、C组、D组NPEV。将检出各分离株的VP1编码区通过MegAlign软件进行同源性和一致性分析。结果表明各研究分离株与原型株VP1核苷酸编码区的同源性在75%-82%,与各地区参考株核苷酸编码同源性在75%-97.8%,研究分离株之间核苷酸编码同源性在75%-100%之间。[结 论]1.环境污水中PV监测结果检出主要以PV-1型、PV-3型为主,并没有检测出PV-2型;2.检出的肠道病毒种类多样,分布不一,主要以B组病毒为主,E6、E30检出率较高为优势型别肠道病毒;3.从分子流行病学的角度揭示两地肠道病毒在环境中进化较快,在同一地区可能存在多个传播链共同循环的现象;4.环境监测是掌握PV和NPEV区域性流行的有效手段。在实际工作中,将AFP病例监测系统与环境监测系统相结合,能够更好的追踪人群中肠道病毒的循环情况。