【摘 要】
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猪圆环病毒3（PCV3）是一种新发现的猪病病原,目前美国、中国、英国等多个国家陆续发现了PCV3的存在。结合临床症状分析,认为PCV3与猪皮炎肾病综合征（PDNS）、仔猪先天性震颤、母猪繁殖障碍和多系统炎症有关,对养猪业构成了潜在的威胁,需引起养猪业的高度重视。为了全面了解湖南省猪群中PCV3感染情况,帮助猪场在非洲猪瘟背景下制定疫病综合防控措施,有必要建立一种简单、快速及易于高通量检测PCV3抗
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猪圆环病毒3（PCV3）是一种新发现的猪病病原,目前美国、中国、英国等多个国家陆续发现了PCV3的存在。结合临床症状分析,认为PCV3与猪皮炎肾病综合征（PDNS）、仔猪先天性震颤、母猪繁殖障碍和多系统炎症有关,对养猪业构成了潜在的威胁,需引起养猪业的高度重视。为了全面了解湖南省猪群中PCV3感染情况,帮助猪场在非洲猪瘟背景下制定疫病综合防控措施,有必要建立一种简单、快速及易于高通量检测PCV3抗体的ELISA方法,同时对湖南省的猪群进行PCV3流行病学调查。本研究将PCV3 Cap蛋白截去核定位序列（NLS）后对应的d Cap基因克隆至p ET28-a（+）并转入大肠杆菌BL21（DE3）,得到重组菌后进行蛋白表达。采用镍离子亲和层析纯化d Cap蛋白。将纯化的d Cap蛋白作为抗原进行包被,建立检测PCV3抗体的间接ELISA的方法。利用本方法对湖南省11个地级市的1175份临床血清进行检测。利用PCR方法鉴定出湖南省11个地级市的PCV3全基因组序列,并进行序列分析。结果显示,dCap蛋白主要以包涵体形式表达,将纯化的d Cap蛋白稀释到0.2μg/m L并进行包被,且血清50倍稀释,酶标二抗1:8000稀释时,ELISA的反应条件最佳,S/P临界值为0.270,批内及批间差异均小于10%,本方法与PCV2、CSFV、PRV和PRRSV阳性血清无交叉反应。对湖南省11个地级市的29个猪场的血清流行病学调查结果表明PCV3抗体猪场阳性率100.00%（29/29）,样品总阳性率为58.64%（689/1175）,且猪群感染PCV3普遍在肥猪阶段。猪群中PCV3抗体的S/P值在0.270～2.0之间,但70%以上的样品其S/P值在0.4以下,抗体水平均不高。本研究共得到11株PCV3全基因组序列。11株PCV3全基因组序列、Rep蛋白和Cap蛋白氨基酸序列同源性范围分别为98.6%～100.0%、98.7%～100.0%和96.3%～100.0%,与国内外毒株的同源性范围分别为97.9%～99.7%、98.3%～100.0%和95.3%～100.0%。上述结果表明本研究建立的间接ELISA方法具有良好的敏感性和特异性,可用于PCV3抗体检测。通过血清和分子流行病学调查,发现湖南省猪群中PCV3感染十分普遍,且各地区的毒株同源性较高。此研究为PCV3在湖南省的流行性研究提供了科学依据。
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