论文部分内容阅读
核因子κB(NF-κB)是一类与炎症和肿瘤相关的重要转录因子，普遍存在于体内各种类型的细胞内。当受到外界刺激时NF-κB会被激活，从而调节下游基因的表达，影响细胞的生长、凋亡、免疫与癌变等过程。血管病变被认为是一种炎症反应，与NF-κB信号通路有密切关系，研究认为NF-κB的激活是动脉粥样硬化等心血管疾病发生发展的始动机制之一，因此研究NF-κB与心血管疾病的关系有很重要的意义。 本论文以血管内皮细胞作为研究对象，分别用TNFα诱导及p65 siRNA干扰处理，用基因芯片技术对转录因子NF-κB在血管内皮细胞的靶基因和靶miRNA进行了鉴定，主要研究结果如下: 1.采用基因芯片技术检测TNFα诱导及p65 siRNA干扰的主动脉内皮细胞的基因表达谱。对样品进行初步的qPCR检测后得到处理成功的样品，之后进行基因表达谱检测。筛选得到基因表达变化倍数大于1.5倍的61个上调和49个下调的NF-κB靶基因，对NF-κB靶基因与相关疾病进行分析，发现9个靶基因与4种血管相关疾病关系密切。基因本体论(Gene Ontology，GO)分析发现，这些靶基因与炎症、免疫、代谢、刺激应答和器官发育等生物过程有关。此外，KEGG分析发现，T细胞受体(T cell receptor，TCR)和类Toll受体(Toll-like receptors，TLR)通路的活化也可以进一步激活NF-κB信号通路，一个基因可同时在几个通路发挥作用。 2.采用基因芯片技术对TNFα和p65 siRNA处理后主动脉内皮细胞中NF-κB的靶miRNA进行鉴定。筛选后得到表达变化倍数大于1.5倍的23个上调和6个下调的NF-κB的靶miRNA，对这些NF-κB靶miRNA与相关疾病进行分析，发现10个miRNA与4种血管相关疾病关系密切。综合近年研究与本论文表达谱结果，得到NF-κB与miR-199a、miR-10a和miR-15的3个调控回路关系。对miRNA进行靶基因预测后与第一部分得到的NF-κB靶基因比较取交集，共有40个NF-κB靶miRNA的靶基因。GO分析表明这些靶基因多涉及调控、免疫、生物粘附及细胞分化等生物过程。分析NF-κB靶miRNA与靶基因的相互调控关系，有15个miRNA参与负调控，21个miRNA参与正调控。其中过表达的miR-339-5p可能调控着Cadm4的下调;Wisp1受到miR-339-5p、miR-10a、miR-107、miR-15b、miR-93和miR-762等几个miRNA的负调控。Dkk2和Syne1受到miR-10a的正调控。这些正负调控形成了复杂的调控网络，参与NF-κB相关的过程。