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巴斯德毕赤酵母表达系统是目前优秀、应用广泛的外源基因表达系统之一。本研究通过PCR定点突变技术,将Bt Cry1A基因后部的Pst I酶切位点突变掉,以方便构建表达载体。然后成功构建了Bt及Bt-CpTI基因的重组分泌型酵母表达载体pPIC9KVBA及pPIC9KVBCA。并且通过筛选获得了分泌表达Bt及Bt-CpTI蛋白的重组酵母菌GS115/pPIC9KVBA,GS115/pPIC9KVBCA,Bt试纸条和SDS-PAGE检测均表明已经成功表达了目的蛋白,同时生物测定表明在毕赤酵母中表达的Bt及Bt-CpTI毒蛋白具有杀虫性。
棉花具有明显的杂种优势,优良的杂种一代能比常规品种增产显著,同时可以改善品质,增强抗逆性,因而发展抗虫杂交棉对于实现棉花高产、稳产、高效,使棉花生产再上新台阶具有重大意义。本文对优质的三系杂交抗虫棉G75及其亲本进行分子检测和性状分析,结果如下:PCR检测了23个抗虫棉G75单株的Bt基因,结果全部为阳性;通过优化Southern杂交条件,得到了良好的杂交结果,该结果表明G75的Bt Cry1A基因的拷贝数为3~4个,与其亲本的拷贝数及带型较一致;使用ELISA检测G75培育体系顶部叶片不同时期的Bt毒蛋白表达量,结果表明G75及其亲本的Bt蛋白的表达趋势一致,具有时空性,但G75在生育期前期和后期表达的Bt蛋白含量显著高于亲本,蕾期至铃期却比亲本含量低;G75在农艺性状中的株高、果枝数与父本Y18较接近,表现为棉株较高,果枝数较多;产量性状中的结铃数及衣分表现超亲优势,籽棉产量较亲本增产显著,较对照鲁15增产13.3%; G75棉纤维品质的杂种优势较弱,表现出中亲优势,均能满足纺织的要求。