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目的:改进白色念珠菌生物被膜基质的提取方法,明确基质中总糖、蛋白质和脂质的成分含量;研究鱼腥草素钠对白色念珠菌细胞壁的作用。方法:1.首先在静态和流动态条件下分别孵育白色念珠菌（Candida albicans）生物被膜,比较六种方法提取白色念珠菌生物被膜基质（Extracellular matrix,EM）中的效率,即涡旋加超声波处理（Vortexing and ultrasonication,VU）,甲醛加涡旋和超声波处理（Formaldehyde-VU）,EDTA加涡旋和超声波处理（EDTA-VU）,NaOH加涡旋和超声波（NaOH-VU）,乙醇加涡旋和超声波处理（Ethanol-VU）,离子交换树脂（包括阳离子/阴离子交换树脂）加涡旋和超声波处理（CER/AER-VU）。随后通过XTT法、平板计数法监测提取被膜基质方法的稳定性;干重法测量生物被膜和被膜基质重量;检测包括白色念珠菌、光滑念珠菌、克柔念珠菌和热带念珠菌这四种念珠菌的生物被膜基质中总糖、蛋白质和甘油三酯的含量。2.通过7种EM化学成分的靶向酶（包括蛋白酶K、蛋白酶XIV、β-N-乙酰基-氨基葡萄糖苷酶、β-葡糖醛酸糖苷酶（货号G7017）、DNase I、RNase A和溶壁酶）来分析白色念珠菌对鱼腥草素钠（Sodium Houttuynia,SH）的敏感性;将SH分别与EM、细胞壁、海藻糖（市售β-1,3-葡聚糖）和几丁质（虾壳）共孵育后,通过超高效液相色谱（UPLC）分析SH与它们的吸附情况;通过白色念珠菌标准株SC5314和pleckstrin homology domain containing,family B（evectins）member1即phr1突变株phr1-/-分别与β-1,3-葡聚糖抗体和麦胚凝集素Wheat GermAgglutinin（WGA）共孵育后荧光暴露,观察SH与葡聚糖、几丁质的物理相互作用。结果:在提取念珠菌生物被膜基质方法中,水提法中VU效率高,回收率为58.65%且发生细胞裂解少,而离子交换树脂法尤其是阳离子交换树脂法（CER-VU pH 7.8）明显优于水提法,回收率达到90.30%。XTT平板涂布法和干重法显示离子交换树脂法提取被膜基质对细胞的活力损伤可忽略不计,对细胞完整性无显著性影响。提取念珠菌被膜基质三大物质产量显示:白色念珠菌EM中总糖含量最高,蛋白质含量次之,甘油三酯含量最少;光滑念珠菌总糖含量最高,甘油三酯次之;克柔念珠菌总糖含量与甘油三酯含量相当,蛋白质含量最低;热带念珠菌三大物质含量差异不大,总糖含量最高,紧接着是甘油三酯和蛋白质。通过UPLC-Q-TOF-MS进行非靶标代谢组学检测差异表达的代谢物进一步证实了CER-VU的高效率,因为鉴定了大量代谢物（CER/VU=217/198）,包括大量匹配的脂质和衍生物（CER/VU=43/45）,糖和衍生物（CER/VU=20/18）,氨基酸和衍生物（CER/VU=54/48）,核酸和衍生物（CER/VU=19/15）。与单独的VU相比,CER-VU显示高度参与信号通路。使用白色念珠菌SC5314和phr1-/-通过药敏试验、酶消化、UPLC检测和荧光暴露试验研究SH与真菌细胞壁相关的抗真菌机制。SH对SC5314的SMIC80为512μg/mL,而SH对phr1-/-的SMIC80为64μg/mL,降低了8倍,两种念珠菌属的MIC相当。在酶促裂解后,只有溶壁酶可以显著增加白色念珠菌SC5314（64μg/mL）中SH的抗真菌作用,但在phr1-/-中无效。尽管SH对SC5314和phr1-/-的MIC相差不大,SH对SC5314的MIC为64μg/mL,对phr1-/-的MIC为32μg/mL,但两种菌株的SMIC80悬殊,与SC5314(SMIC80为512μg/mL)相比,phr1-/-对SH更敏感(SMIC80为64μg/mL)。将SH与海藻糖、两种菌株的EM和细胞壁短时间共孵育,UPLC显示在SH同一浓度下,与SH单独处理组相比,SH+海藻糖的峰面积下降了71.6%,SH+SC5314 EM的峰面积下降38.2%,SH+SC5314细胞壁的峰面积下降62.6%,而SH+phr1-/-EM的峰面积下降了70%,SH+phr1-/-细胞壁下降了53.2%。荧光测定显示,在白色念珠菌SC5314和phr1-/-中SH通过暴露β-1,3-葡聚糖和几丁质诱导细胞壁重构。结论:我们引入了一系列常用的方法来提取静态和动态C.albicans生物被膜的EM,并表明CER-VU是一种更为有效提取方法;与VU方法相比,CER-VU可以产生更多的糖、蛋白质和脂质物质;SH可能受到细胞壁和基质中β-1,3-葡聚糖的阻碍,并最终通过细胞壁重构（包括β-1,3-葡聚糖和几丁质暴露）导致真菌对SH攻击做出反应,暴露β-1,3-葡聚糖可以为新型抗真菌剂提供靶向思路。本研究有助于全面了解生物被膜基质的成分及功能,并为SH潜在的抗真菌作用机制提供了实验依据。