HS对肝缺血再灌注损伤时肝细胞凋亡及Bcl-2和CHOP表达的影响

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目的:  通过建立大鼠肝脏的缺血再灌注损伤模型,观察饱和氢气生理盐水(hydrogen-saturated saline,HS)预处理对肝缺血再灌注损伤的作用,测定Bcl-2和CHOP蛋白表达,从分子水平及超微结构来研究线粒体改变、细胞凋亡与肝脏缺血再灌注损伤的关系,为临床上肝脏外科围手术期缺血再灌注损伤中应用饱和氢气生理盐水提供理论基础。  方法:  使用随机数字表法将40只雄性SD大鼠,完全随机分为假手术组(Sham组)8只;对照组(NS组)共2组,每组8只,分别为NS1组和NS2组;实验组(HS组)共2组,每组8只,分别为HS1组和HS2组,其中对照组和实验组的1组和2组缺血时间分别为20min和60min。假手术组和对照组术前10min腹腔注射生理盐水10ml/kg,实验组术前10min腹腔注射饱和氢气生理盐水10ml/kg。动物模型为70%肝脏缺血再灌注模型。各组大鼠肝脏再灌注后6h取肝脏标本及静脉血。  1.运用自动生化分析仪检测肝功能ALT、AST。比色法检测肝组织中SOD,评估肝组织氧化反应程度。  2.病理切片HE染色观察肝组织形态学改变。利用透射电镜来观察肝细胞以及线粒体的超微结构变化。  3.Western Blot法检测Bcl-2蛋白和CHOP蛋白表达的改变。  4.TUNEL染色观察并计算肝细胞凋亡指数。  结果:  1.与假手术组比较,对照组ALT、AST水平明显升高,SOD活性降低,其中以NS2组改变最为显著(P<0.05)。与对照组相比,实验组ALT、AST水平均显著降低,SOD活性升高(P<0.05)。  2.光镜下观察:与假手术组比较,对照组可见肝细胞不同程度水肿变性,其中NS2组可见肝小叶结构紊乱,肝细胞变性广泛,出现点状坏死甚至灶性坏死,伴有大量炎性细胞浸润。与对照组比较,实验组肝脏细胞水肿、坏死、炎性细胞浸润程度显著减轻。透射电镜下观察:与假手术组比较,对照组呈现不同程度的肝细胞线粒体空泡化,线粒体嵴紊乱,线粒体膜失去连续性。与对照组比较,实验组肝脏细胞线粒体病理改变较轻。  3.与假手术组比较,对照组Bcl-2蛋白表达降低,CHOP蛋白表达升高(P<0.05),与对照组比较,实验组Bcl-2蛋白表达升高,CHOP蛋白表达降低(P<0.05)。  4.与假手术组比较,对照组凋亡指数升高(P<0.05);与对照组比较,实验组凋亡指数降低(P<0.05)。  结论:  1.在大鼠肝脏缺血再灌注损伤中,随着缺血时间延长,肝细胞及其线粒体功能和结构损伤逐渐加重,而饱和氢气生理盐水对肝细胞及其线粒体的功能和形态有一定保护作用。  2.饱和氢气生理盐水可能通过上调Bcl-2蛋白表达和下调CHOP蛋白表达,抑制肝细胞凋亡,从而发挥抗肝脏缺血再灌注损伤的作用。
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